细胞融合和单克隆抗体PPT课件.pptx

细胞融合和单克隆抗体;一、细胞融合;细胞融合是正常的生命活动。;二、细胞融合研究进展;三、动植物细胞的融合过程;三、动植物细胞的融合过程;四、细胞融合的意义;五、细胞融合的常用方法;五、细胞融合的常用方法;五、细胞融合的常用方法;五、细胞融合的常用方法;五、细胞融合的常用方法;什么是抗体？

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

B淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。;（一）获得抗体的传统方法;人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。;2、怎样才能获得单克隆抗体？;如何大量生产单克隆抗体？;注射抗原;动物特异性免疫

分离B淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）

细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）

第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）

第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。

;20;单克隆抗体的优点：

特异性强，灵敏度高，可大量制备。;单克隆抗体与早孕测试;核移植技术、动物克隆和转基因动物;核移植技术：所谓核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。;哺乳类的细胞核移植;（二）核移植技术的一般操作程序;2．核供体细胞的准备

在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组；

其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成???受精到发育成一个正常动物个体的全过程。

供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球和体细胞。另外，核供体细胞的来源还有胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞。;3．细胞核移植

常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透明带下注射。胞质内注射是用一个外径5～8μm的注核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的方法。透明带下注射则是把供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合。;4．激活

卵母细胞的激活涉及的因素很多，无论是受精引起的卵母细胞激活还是人工的激活，都会引起卵母细胞发生一系列的反应，这些反应是胚胎发育所必需的。其激活原理是通过电刺激、钙离子载体等方法，使卵母细胞从MII期中解放出来，并转到“受精”的状态。;核移植技术的应用;二、动物克隆;名字：Dolly(1996.7.5-2003.2.14);1;三、转基因动物;（一）转基因动物的概念

转基因动物（transgenicanimal）是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。

外源基因随细胞分裂分配到所有子细胞中并遗传给后代，这种动物叫转基因动物。;（二）转基因动物技术的主要步骤;（三）转基因动物的技术路线

;?整合胚胎移植的技术路线

;整合卵受精的技术路线：

?

目的基因转基因动物

导入

逆转录病毒妊娠

精子

感染

体外受精胚胎移植

卵母细胞成熟卵细胞囊胚受体动物子宫

?

特点：卵母细胞导入目的基因后再与精子受精。;（四）转