共表达dll4，p16基因真核表达载体构建及对白血病细胞的影响的开题报告.pdfVIP

共表达dll4，p16基因真核表达载体构建及对白血病细胞

的影响的开题报告

一、选题背景与意义

白血病作为一种常见的血液系统恶性疾病，其发病率逐年增长，对患者的生活造

成了严重的影响和威胁。近年来，基因治疗已逐渐成为白血病治疗的热点领域之一，

其中基因表达的调控和干预被广泛地应用于疾病治疗中。因此，在深入研究白血病的

分子机制和基因治疗的实践中，构建真核表达载体并探究其调控效果具有重要的学术

和应用价值。

Dll4和p16作为两种重要的基因，均在白血病的发病和进展中发挥着重要的作用。

Dll4基因编码的一种跨膜蛋白质，是Notch信号通路的重要组成部分。该通路参与了

生物体的多种生理和病理过程，包括细胞增殖、分化和凋亡等。而p16则作为一种很

重要的抑癌基因，能够调节细胞生长和周期，并参与调控白血病的发生和进展过程。

因此，本研究拟构建Dll4和p16基因的真核表达载体，并应用于白血病细胞模

型，探究其基因表达的调控效果和其对白血病细胞增殖、分化和凋亡等方面的影响，

为白血病的分子机制和基因治疗提供理论及实践基础支持。

二、研究内容与方法

1.构建Dll4和p16基因真核表达载体

采用PCR扩增的方法从人类基因组DNA中扩增所需的Dll4和p16基因片段，并

克隆到真核表达载体pCDNA3.1+中；将构建完成的真核表达载体转化到大肠杆菌中，

扩增并纯化目标DNA片段，并通过限制性酶切以及DNA测序检测，鉴定所构建的真

核表达载体的正确性和稳定性。

2.应用真核表达载体对白血病细胞进行转染

选用人类白血病细胞株K562细胞作为研究对象，将上述构建完成的Dll4和p16

基因真核表达载体应用于白血病细胞的转染；同时设置对照组，在相似的条件下，进

行空表达载体的转染处理。随后，通过Westernblotting和Real-timePCR等方法检测

转染细胞中目标基因的表达水平，以此说明真核表达载体在转染后对细胞内基因表达

的调控效果。

3.观察真核表达载体对白血病细胞生长、增殖、分化和凋亡的影响

在上述转染处理后，通过MTT、CCK-8、流式细胞术、细胞周期分析等技术手段，

评估真核表达载体在转染后对白血病细胞生长、增殖、分化和凋亡的影响；分析两者

之间的差异性，从而说明所构建的真核表达载体对白血病的治疗潜力。

三、研究预期成果

通过本研究，构建Dll4和p16基因的真核表达载体，并对其在白血病细胞模型

中的调控和治疗效果进行评价和考察，进而探究这两个基因在白血病的病理生理机制

中的作用；这不仅为白血病的分子治疗提供了理论和实践的支撑，而且对基因治疗的

研究提供了新的思路和方向，具有一定的学术和应用价值。