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§1-1DNA重组技术基本工具和基本操作程序;;;;;;处理基因工程关键步骤需要工具;;基因剪刀——限制性内切酶(简称限制酶);识别序列;大肠杆菌(E.coli)一个限制酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。;;被限制酶切开DNA两条单链切口,带有几个伸出核苷酸,他们之间恰好互补配对,这么切口叫黏性末端。;平末端;要想取得某个特定性状基因必须要用限制酶切几个切口?可产生几个黏性末端?;;E.coliDNA连接酶;为何要用运载体?;;;;大肠杆菌质粒:;;;;;目标基因;1、目标基因获取;概念:基因文库
(genelibrary);基因组文库:
基因文库中包含了一个生物全部基因,这种基因文库叫做基因组文库.
部分基因文库:
基因文库中包含了一个生物一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.;;cDNA文库构建;基因组DNA文库;怎样从基因文库中得到所需要基因?;④利用PCR技术扩增目标基因;DNA序列自动测序仪:
PCR技术:;⑤人工合成;3、基因表示载体(重组质粒)构建;2〉基因表示载体组成:;步骤二:目标基因与运载体重组;;2、基因表示载体作用;目标基因与运载体结合;;;1、将目标基因导入植物细胞;(2)基因枪法;(3)花粉通道法;2、将目标基因导入动物细胞;3、将目标基因导入微生物细胞;步骤四:目标基因检测和表示;(四)目标基因检测与判定;不能,受体细胞必须表现出特定性状,才能说明目标基因完成了表示。;知识延伸——DNA分子杂交技术;返回;;复习题;;;;;;
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