冰冻切片-超薄切片与石蜡切片的区别.docx

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冰冻切片，超薄切片与石蜡切片的区别

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组织切片伴随着显微镜技术和免疫实验等的发展而得到广泛的应用，为满足临床上对各种标本的要求在石蜡切片的基础上又衍生了其他种类的切片，如冰冻切片、石蜡切片、碳蜡切片、超薄切片、塑料切片等。本文来着重介绍一下冰冻切片，超薄切片与石蜡切片的区别。

1.组织切片的来源

组织制片技术的历史估计要追溯到1665年了，1665年HOOk发现细胞，就已经开始在临床工作中应用了，到现在应该已经有300多年的历史了。［1］最早是冰冻切片；后来，又进一步利用石蜡的硬度，用石蜡包埋组织，制成石腊切片;再到利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。［3］组织切片的技术随着生物学和医学的发展而发展。因为切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，而且可以显示细胞和组织中某些化学成分含量的变化。［10］因此，组织切片技术是教学、医学和科研中不可或缺的一个组成部分。

2.组织切片的特点

任何组织切片的原理都是依靠切片机将其进行切成薄片，所以，一个高品质的切片机对实验结果也很重要。切片机将组织切成薄片(厚度一般用μm)，然后再对其进行染色从而得到实验结果。［5］在切成薄片之前一定要想办法使组织内部渗入足够的支持物质，让组织能够保持一定的硬度，最后再使用切片机进行切片。渗透到组织内部中的支持剂(物质)有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。［7］病理学研究中最常用的组织切片技术是石蜡切片和冷冻切片。组织切片特点是将研究的组织进行切片，然后进行各种染色。冰冻组织切片只是直接利用快速冷冻法来进行切片的。

3.各种切片的制作方法不同

冰冻切片：冰冻切片的原理就是利用温度骤降，来制作切片。冰晶越少，代表切片抗原越稳定，实验准确度越高。减少冰晶的行成，临床常用的方法①速冻法：缩短从-33℃-43℃的时间，减少冰晶的形成,从而制作冰冻切片主要为干冰-丙酮(酒精)法液氮法。②将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，［3］利用高渗吸收组织中水分，减少组织中的含水量。这样也可以达到减少冰晶的目的，从而提高切片实验结果的准确率。

石蜡切片：石蜡切片制作相对而言，稍微复杂一些，一般分为三步［6］①脱水、透明等过程应在4℃下进行，以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm，使组织充分脱水、透明、浸蜡。③浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以溶点低的软蜡最好(即低温石蜡包埋)。

超薄切片：电镜标本制作，应用超薄切片机(Ultrotome)进行切片。制作方法大致与石蜡切片相同。

4.保存方法不同

冰冻切片：冰冻切片制作完成后如果不给它进行染色，则必须吹干，放入低温冰箱内保存。也可以先对切片进行预固定后放入冰箱保存起来。

石蜡切片：石蜡切片应放入37℃恒温箱过夜，这样可以减少染色中脱片现象。切片如需长期贮存，可存放于4℃冰箱内备用。注意，不要碰水。

超薄切片是一种衍生物，有冰冻超薄切片也有石蜡超薄切片，故保存方式与其相同。

5.各种切片的临床应用

冰冻切片：是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，特别是细胞表面抗原。新鲜的组织和已经固定的组织都可以来制作冰冻切片。

超薄切片：超薄切片技术是在临床工作中经常使用的一种透射电镜制样技术，在材料科学领域都有着广泛的应用，尤其适合有机高分子材料和无机粉体材料，［3］它可以非常简单方便的获得纳米级切片，以便于透射电镜观察；另外，超薄切片在金属材料和其它无机材料也有一定的应用。［8］另外，因为这一技术也可以非常方便的获得样品的截面信息，因此在扫描电镜和原子力显微镜制样方面也有一定的应用。

石蜡切片：优点就是可以把组织结构保存比较好，在病理和回顾性的研究中比较实用。它可以切成连续的薄片，让组织结构暴露的特别清晰，抗原定位也比较准确。

6.各种切片的区别

①冰冻切片的操作步骤少，节省试剂，而且适用范围比较广，也比较容易定位，冷冻切片的组织结构也保存的很完整。但是，它的缺点就是冰冻的切片机价格较高，切片不易控制厚度，而且保存起来也没有石蜡切片方便快捷。

②石蜡切片的优点就是可以切出特别薄的切片，也便于标本的长期保存、可以在临床中反复观察。缺点就是，它的步骤比较繁琐。结果出来的也慢，组织脱水严重、原有形态位置也容易改变，会破坏组织结构的完整性，而且所需设备试剂也比较多、甚至有一些还会对操作人员的身体有一定的损害。

③冰冻切片主要是通过冷冻获得硬度从而制成的切片，与石蜡切片不同的是，它没有经过充分的脱水，对组织的观察可能会有影响，一般冰冻的准确率是95%，而石蜡可以达到98%以上。［4］一般用比较好的冷冻切片机，冰冻切片