大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒 说明书.pdfVIP

大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第1页

大鼠甲状旁腺激素（PTH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用

预期应用

ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中甲状旁腺激素（PTH）含量。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被单抗的微孔中依次加入标本或标准品、生

物素化的抗PTH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过

氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

PTH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板：一块（96孔）

2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以

上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,500pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释1,500

pg/ml，750pg/ml，375pg/ml，187.5pg/ml，93.75pg/ml，46.88pg/ml，23.44pg/ml，样品稀

释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制750pg/ml标准品：取0.5ml1,500pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的

Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计

算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检

测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶

大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第1页

大鼠甲状旁腺激素(PTH)酶联免疫分析试剂盒说明书--第2页

液A。

8.底物溶液：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。

标本的采集及保存

1.细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。

2.血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，

或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15

分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，如需长期保存，请置-20℃密封保存，但也不应超过3

个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；高血脂的标本不需

进行特殊处理，可直接检测。

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试

剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标

准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，

轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性