DB34T 4831-2024亳菊组培快繁与脱毒技术规程.docx

ICS65.020.20CCSB05

34

安徽省地方标准

DB34/T4831—2024

亳菊组培快繁与脱毒技术规程

Technicalregulationsfortissueculturerapidpropagationanddetoxificationof

Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.

2024-07-30发布2024-08-30实施

安徽省市场监督管理局发布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽农业大学提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽农业大学、亳州兴禾农业发展有限公司。

本文件主要起草人：高俊山、刘凯、李大辉、赵梦茹、黄举飞、李卫文、周雪娟、陈情情、郭宁、杨忠、刘威、牛岩岩、陈娜。

亳菊组培快繁与脱毒技术规程

1范围

本文件规定了亳菊（Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.）组培快繁与脱毒技术规程中的术语和定义、外植体选择、消毒灭菌、茎尖脱毒、病毒检测、增殖培养、生根培养、炼苗、移栽、苗床管理及包装运输。

本文件适用于亳菊工厂化组培脱毒苗生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技术规程《中华人民共和国药典》（一部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

亳菊Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.

亳菊是《中华人民共和国药典》（一部）收录的中药材，为菊科植物菊的干燥头状花序，呈倒圆锥形或圆筒形，直径1.5cm～3cm，舌状花数层，位于外围，类白色，纵向折缩，管状花多数，位于中央，黄色，顶端5齿裂，原产地安徽亳州，是我国5大药用菊花之一。

3.2

外植体explant

从自然生长的活体植物上获取的用于植物离体培养的起始材料。

3.3

脱毒detoxification

是指通过特定的植物脱毒技术手段，如高温处理或茎尖组织培养等方法，去除或显著降低植物体内的病毒。

3.4

试管苗test-tubeplantlet

经过组织培养获得的幼苗，是组织培养中炼苗前的幼嫩植株。

4试管苗培养

4,1外植体选择

选取生长健壮、无病虫害的亳菊植株，切取1cm～2cm的嫩茎作为外植体。

4.2消毒灭菌

先在流水下冲洗30min，然后移至超净工作台。将嫩茎置于无菌瓶中，倒入适量75%乙醇，使嫩茎浸泡并振荡无菌瓶消毒30s，迅速倒出酒精，用适量无菌水冲洗3次，然后用1%次氯酸钠浸泡约10min，期间不断振荡，倒出废液后用无菌水冲洗嫩茎（4～5）次，静置待用。

4.3茎尖脱毒

取消毒处理后的亳菊嫩茎在显微镜下切取0.5mm以下茎尖，接种至起动培养基（MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH5.8）上进行培养，培养条件为温度（25±2）℃、光照16h/d、光照强度（1500～2000）lx的培养室中培养，待苗长到5cm以上时进行增殖培养。

4,4病毒检测

遵照NY/T406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技术规程，对即将增殖培养的单株幼苗进行病毒检测。采用特异性引物PCR法对亳菊组培苗中的TAV、CMV、CVB、CVR、TSWV、CSVD等病毒进行检测，对于病毒检测符合要求的幼苗进行增殖培养。

4.5增殖培养

将经过启动培养获得的组培苗切成1.5cm～2cm带有（2～3）个叶片的茎段，接种至增殖培养基（MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH5.8）上进行增殖培养，培养条件为温度（25±2）℃、光照16h/d、光照强度（2200～4000）lx的培养室中培养，25d左右可进行生根培养。

4,6生根培养

将增殖培养获得的高度约为7cm