化妆品综合实训实验六洗发香波中菌落总数测定.pptx

《化妆品综合实训》实验（六）洗发香波中菌落总数测定授课老师：高南（高级工程师）

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01实验目的02实验原理03实验基本操作04实验步骤05实验记录与实验结果06实验注意事项07思考题主要内容

1、实验目的（1）了解洗发香波中菌落总数的检测标准及测试方法；

（2）掌握洗发香波中菌落总数的检测的意义。

2、实验原理（1）菌落总数化妆品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等）培养后，1g(1mL)检样中形成的微生物菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。

菌落总数的测定（平板活菌计数法）是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落（即由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体）的生理及培养特征进行的。也就是说，一个菌落即代表一个单细胞。首先将待测样品制成均匀的、一系列不同稀释度的稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散，使之成为单个细胞状态存在（否则1个菌落就不能代表1个菌）；再取一定稀释倍数的一定量稀释液接种到培养基上，使其均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的数目，可计算样品中的含菌数。

（1）锥形瓶的灭菌包扎；（2）灭菌锅的使用；（3）震荡器的使用。3、实验基本操作

4、实验步骤（1）培养基和试剂的配制卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温-807g蒸馏水1000ml；制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温-80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温-80，混匀，调pH值为7.1-7.4，加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

生理盐水成分：氯化钠8.5g；蒸馏水加至1000mL。制法：溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，121℃高压灭菌20min。0.5%氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenylterazoliumchloride，TTC）成分：TTC0.5g；蒸馏水100mL。制法：溶解后过滤除菌，或115℃高压灭菌20min，装于棕色试剂瓶，置4℃冰箱备用。

（2）操作步骤1）用灭菌吸管吸取1：10（10%样品水溶液）稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，……等，每个稀释度应换1支吸管。2）将融化并冷至45℃—50℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约20mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约20mL卵磷脂吐温-80营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h，为空白对照。3）为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温-80营养琼脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。

（3）菌落计数1）首先选取平均菌落数在30-300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数报告之。2）若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则以其中稀释度较低的平皿的菌落数报告之。3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一个稀释度大于300，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。6）若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g或每mL小于10CFU。7）菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。

序号稀释倍数菌落总数1102100310004……5……6……7……8……5、实验记