《梅花鹿布鲁氏菌病胶体金免疫层析检测方法》.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

PAGE2

ICS

FORMTEXT65.020.30

CCS

FORMTEXTB45

FORMTEXT2201

FORMTEXT长春市地方标准

DBFORMTEXT2201/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXT2023

FORMTEXT?????

FORMTEXT梅花鹿布鲁氏菌病胶体金免疫层析检测方法

FORMTEXTSpecificationforthedetectionofcolloidalgoldteststripsforsikadeerbrucellosis

FORMDROPDOWN

FORMTEXT（本草案完成时间：2023-4-1）

FORMDROPDOWN

FORMTEXT2023-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXT2024-FORMTEXT3-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT长春市市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB2201/TXXXX—2023

PAGE2

STYLEREF标准文件_文件编号DB2201/TXXXX—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由长春市畜牧业管理局归口。

本文件起草单位：长春市乾艺生物科技研究院、吉林省畜牧兽医科学研究院、长春市农业科学院。

本文件主要起草人：田来明、权心娇、田贺实、赫雪、田怡豪、王凯立、王向辉、尚丽元、高启臣、张鸿、赵春梅。

梅花鹿布鲁氏菌病胶体金免疫层析检测方法

范围

本文件规定了梅花鹿布鲁氏菌病胶体金免疫层析试纸条的制备、样品检测、结果判定的要求。

本文件适用于梅花鹿布鲁氏菌病胶体金免疫层析试纸条的制备。

规范性引用文件

下列文件中是应用本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T40369-2021免疫层析试纸条检测通则

GB19489实验室生物安全通用要求

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

鹿布鲁氏菌病

由布鲁氏菌（Brucella）引起的人畜共患性传染病，是我国乙类传染病，母鹿感染后主要表现为妊娠期流产，或产死胎、弱仔等；公畜感染后主要表现为睾丸炎、附睾炎、睾丸肿大等。

仪器设备

三维喷点平台，定量喷液范围20nl~2μL，最小划线喷量0.1μL/sec。

加热磁力搅拌器，可调节加热盘。

紫外分光光度计，200nm~1000nm。

高速冷冻离心机，最高转速18000r/min。

精密可程式烘箱，25~80℃。

切条机，最小切割宽度1mm。

耗材

硝酸纤维素膜

玻璃纤维素膜

吸水纸

样品垫

PVC底板

精密PH试纸

试剂

1%氯金酸溶液，见表A.1。

1%柠檬酸三钠溶液，见表A.2。

鹿脂多糖（LPS）抗原，见附录B。

胶体金溶液，见附录C。

胶体金探针溶液，见附录D。

羊抗兔IgG，兔抗鹿IgG应符合国家标准。

90%（V/V）苯酚溶液，见表A.3。

含1%饱和醋酸钠的冷甲醇，见表A.4。

重悬液，表A.5。

布鲁氏菌病阴性标准血清、阳性标准血清符合国家标准。

样品处理

采集血样于EP管中，管上标记好鹿只编号，将EP管放入装有冰袋的保温箱中保存。不同鹿场样品需贴好标签，写明鹿场名称、采集地点、采集时间等信息。血样3000rpm离心5min获得血清，暂不检测的样品于-80℃保存。

操作步骤

制备金标垫，稀释胶体金探针至5OD/ul，室温且湿度20~40％条件下，将溶液用三维喷点平台喷到胶体金垫上，压力设置为10PSI，喷点参数为2~6ul/cm。

将制备好的金标垫置于湿度20%，37℃条件下干燥，干燥后密封储存待用。

使用切条机将金标垫均匀切割成长0.8cm条带，金条带两端边缘弃除。

制备硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜室温下平衡1小时。

将LPS抗原稀释至0.125mg/ml，羊抗兔IgG稀释至1mg/ml使用三维喷点平台，设定喷点量为1ul/cm，点样。

将制备好的硝酸纤维素膜于湿度20%，37℃条件下干燥，干燥后密封储存待用。

使用切条机将硝酸纤维素膜均匀切割成长2.5cm条带。

撕掉PVC底板聚酯背衬，将、硝酸纤维素膜按照划线指示位置粘贴在PVC底板上。

将吸水纸切割成长1.6cm条带粘贴在硝酸纤维素膜上，与硝酸纤维素重叠。

将金标垫粘贴在硝酸纤维素膜下端，金标垫覆盖硝