生物技术与分离提取市公开课金奖市赛课一等奖课件.pptVIP

生物技术与分离提取第七章第1页第1页

惯用分离提取技术办法:1、破碎法分离提取技术2、离心分离提取技术3、超声波萃取分离法4、微波萃取分离法5、气浮分离法6.色谱法（包括纸色谱、薄层色谱法）7、超临界流体萃取等新兴办法。8、膜分离技术第2页第2页

一、惯用破碎法办法作用办法机械液体剪切超声波机械搅拌压力固体剪切研磨杆和臼球磨机压力Hughes压榨机‘X’压榨机非机械脱水空气干燥真空干燥冷冻干燥溶剂干燥溶胞作用物理作用渗入冲击压力释放冻结和融化化学作用阳阴离子洗涤剂抗生素甘氨酸酶作用溶菌酶和相关酶噬菌体溶胞抗菌素第3页第3页

二、离心分离技术离心分离技术是借助于离心机旋转所产生离心力,依据物质颗粒沉降系数、质量、密度及浮力等因子不同,而使物质分离技术。

离心分离办法：1、差速离心

2、密度梯度离心

3.等密度离心第4页第4页

离心分离办法

????采取不同离心速度和离心时间,使沉降速度不同颗粒分批分离方法,称为差速离心。操作时,采取均匀悬浮液进行离心,选择好离心力和离心时间,使大颗粒先沉降,取出上清液,在加大离心力条件下再进行离心,分离较小颗粒。如此多次离心,使不同大小颗粒分批分离。差速离心所得到沉降物含有较多杂质,需经过重新悬浮和再离心若干次,才干取得较纯分离产物。

????差速离心主要用于分离大小和密度差异较大颗粒。操作简朴方便,但分离效果较差。

1.差速离心第5页第5页

?????密度梯度离心是样品在密度梯度介质中进行离心，使密度不同组分得以分离一个区带分离方法。密度梯度系统是在溶剂中加入一定梯度介质制成。梯度介质应有足够大溶解度，以形成所需密度，不与分离组分反应，而且不会引发分离组分凝聚、变性或失活，惯用有蔗糖、甘油等。使用最多是蔗糖密度梯度系统，其梯度范围是:蔗糖浓度5%~60%，密度1.02~1.30g/cm3。

????2.密度梯度离心

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密度梯度制备可采取梯度混合器,也可将不同浓度蔗糖溶液,小心地一层层加入离心管中,越靠管底,浓度越高,形成阶梯梯度。离心前,把样品小心地铺放在预先制备好密度梯度溶液表面。离心后,不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异颗粒在密度梯度溶液中形成若干条界面清楚不连续区带。各区带内颗粒较均一,分离效果很好。???

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在密度梯度离心过程中,区带位置和宽度随离心时间不同而改变。随离心时间加长,区带会因颗粒扩散而越来越宽。为此,适当增大离心力而缩短离心时间,可降低区带扩宽。第8页第8页

????将CsCl2.CsSO4等介质溶液与样品溶液混合，然后在选定离心力作用下，经足够时间离心，铯盐在离心场中沉降形成密度梯度，样品中不同浮力密度颗粒在各自等密度点位置上形成区带。前述密度梯度离心法中，欲分离颗粒未达到其等密度位置，故分离效果不如等密度离心法好。

????3.等密度离心

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应当注意是,铯盐浓度过高和离心力过大时,铯盐会沉淀管底,严重时会造成事故,故等密度梯度离心需由专业人员经严格计算拟定铯盐浓度和离心机转速及离心时间。另外,铯盐对铝合金转子有很强腐蚀性,故最好使用钛合金转子,转子使用后要仔细清洗并干燥。

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1、低速离心机，其最大转速在8000r/min以内，相对离心力在l0000g下列2、高速离心机，转速：l0000~25000r/min，相对离心力达l0000~l00000g3.超速离心机，转速：25000~80000r/min，最大相对离心力达500000g。按照分离要求，还能够进行差速离心、密度梯度离心和等密度离心。惯用离心机种类第11页第11页

离心条件拟定离心力离心时间（与颗粒沉降时间相关）温度和pH值（预防欲分离物质凝集、变性和失活）n:转子每分钟转数，r/min第12页第12页

超声波在传递过程中存在着正负压强交变周期,在正相位时,对介质分子产生挤压,增长介质本来密度；负相位时,介质分子稀散,介质密度减小。三、超声波萃取分离法超声波萃取仪第13页第13页

超声波并不能使样品内分子产生极化,而是在溶剂和样品之间产生声波空化作用,造成溶液内气泡形成、增长和爆破压缩,从而使固体样品分散,增大样品与萃取溶剂之间接触面积,提升目的物从固相转移到液相传质速率。第14页第14页

四、微波萃取分离法通常,萃取溶剂和固体样品中目标物由不同极性分子组成,萃取体系在微波电磁场作用下,含有一定极性分子从原来热运动状