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小鼠（Mouse）环磷酸鸟苷（cGMP）ELISA检测试剂盒使用说明书

小鼠（Mouse）环磷酸鸟苷（cGMP）ELISA检测试剂盒使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预

先包被环磷酸鸟苷（cGMP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标

准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终

的黄色。颜色的深浅和样品中的环磷酸鸟苷（cGMP）呈正相关。用

酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保管方法样品收集、处理及保管方法样品收集、处理及保管方法样品收集、处理及保管方法

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞

刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速小心地

分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟

取上清。

5.保管：假如样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于

20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL

3.37℃恒温箱

操作注意事项

1.试剂盒保管在28℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的

浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解

后再使用。

2.试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保管。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；依照说明

书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

5.全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成

名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无

样本稀释液6mL3mL无

检测抗体HRP10mL5mL无

20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

底物A6mL3mL无

底物B6mL3mL无

停止液6mL3mL无

封板膜2张2张无

说明书1份1份无

自封袋1个1个无

注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48nmol/L

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓

冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽

孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封

袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不

加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶

（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴

锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去

洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入停止液50μL，15min内，在450nm波优点测定各孔的

OD值。

结果推断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应

OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样

本浓度值。

试剂盒性能

1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于

0.9900。

2.灵敏度：检测浓度小于1.0nmol/L。

3.特异性：不与其它可溶性结构仿佛物交叉反应。

4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.贮藏：28℃，避光防潮保管。

6.有效期：6个月

免责声明

1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床试验或人体试验，否则所

产生的一切后果，由试验者承当，本公司概不负责。

2.严格依照说明书操作，试验者违反说明