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第二節?病毒基因組複製所需的複製酶一些DNA病毒如皰疹病毒、痘病毒、T4噬菌體等可編碼合成自身基因組複製所需要的DNA聚合酶,但有的DNA病毒如SV40、多瘤病毒、細小病毒、?X174、M13、G4、噬菌體則依賴於宿主細胞的DNA聚合酶。一般而言,原核和真核生物以及DNA病毒的DNA複製酶和轉錄酶系統在功能上是完全分開的,其中DNA聚合酶只起複製作用,以產生子代雙鏈DNA分子,而RNA聚合酶只起轉錄作用,以產生RNA,並以mRNA作為範本翻譯合成蛋白質。但對於RNA病毒來說,病毒編碼的一種RNA依賴性RNA聚合酶,即可以是轉錄酶,也可以是複製酶,所以這種酶常被稱為轉錄/複製酶。還有的RNA病毒如逆轉錄病毒可以編碼合成逆轉錄酶/RNaseH,由它催化病毒基因組RNA逆轉錄合成原病毒DNA;DNA病毒如嗜肝DNA病毒、花椰菜花葉病毒編碼合成的DNA聚合酶,也具有逆轉錄酶/RNaseH活性,能夠催化全長的前基因組RNA逆轉錄生成負鏈DNA,再複製形成子代雙鏈DNA分子。除了複製酶以外,DNA病毒的基因組複製還需要病毒或宿主編碼的解旋酶、引發酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)、拓撲異構酶和DNA連接酶等的參與。有些DNA病毒基因組由於缺乏編碼複製酶的能力,因而其基因組的複製必須完全依賴於宿主細胞的複製酶,如SV40、多瘤病毒、細小病毒的DNA複製是在真核細胞內完成的,其複製過程完全依賴於宿主細胞的DNA聚合酶及其相關的酶蛋白。一、依賴於宿主細胞的複製酶但目前的一些研究發現,SV40和多瘤病毒的T抗原蛋白具有解旋酶、拓撲異構酶I和ATPase的酶活性,因而T抗原直接參與了病毒基因組的複製與調控。許多病毒粒子攜帶有自身編碼的複製酶,或在病毒感染迴圈時由病毒基因表達合成的複製酶。DNA病毒來說,病毒複製酶只涉及到DNA複製,不參與轉錄;而對於RNA病毒來說,複製與轉錄是同一種酶。二、病毒基因組自身編碼的複製酶1.DNA病毒自身編碼的複製酶及其相關蛋白一些真核DNA病毒的基因組可編碼DNA複製酶及其相關蛋白,如痘苗病毒的E9LORF編碼分子量為110KD的複製酶,此酶為單一多肽,它除了具有聚合活性外,還具有3端外切酶活性,能進行切口修復。腺病毒DNA聚合酶是在早期表達的,其基因位於基因組的E2B區,這一基因區編碼產生一個140KD的ADDNA聚合酶,其DNA聚合酶既有5-3的聚合活性,也有3′→5′的外切功能,後著可對複製過程中產生的堿基錯配進行較正。嗜肝DNA病毒科的乙型肝炎病毒(HBV)的病毒粒子內攜帶有自身編碼DNA聚合酶和末端DNA結合蛋白(TP)。DNA聚合酶和TP的ORF在HBV基因組的P區內,此DNA聚合酶為鹼性蛋白,富含組氨酸,具有逆轉錄酶和RNaseH的活性。2.RNA病毒自身編碼的複製酶一些dsRNA病毒和-ssRNA病毒粒子都攜帶有自身基因組編碼合成的轉錄/複製酶。例如呼腸孤病毒dsRNA基因組有10-12個節段,其病毒粒子攜帶有自身特異性轉錄/複製酶。通常病毒基因組進入宿主細胞後隨即利用該轉錄/複製酶進行早期轉錄,流感病毒的基因組為分節段的-ssRNA,其病毒粒子中含有自身基因組所編碼的轉錄/複製酶。其中甲型流感病毒的RNAl節段長2341個堿基編碼PB2蛋白;RNA2節段長2341個堿基,編碼PB1蛋白;RNA3節段長2233個堿基.編碼PA蛋白。由PA、PBl、PB2共同組成病毒粒子的轉錄/複製酶複合體。RNA噬菌體如B6、B7、fr、f2、MS2、PRl等僅編碼合成病毒複製酶的一部分組分,如MS2在其RNA的3’端有一個由1635個核苷酸序列構成的複製酶基因,它編碼一個60kD的蛋白,這一蛋白與宿主細胞的延伸因數EF-TU、EF-TS以及核糖體蛋白即S1蛋白之間有很強的親合力,三、病毒蛋白與宿主細胞蛋白構成的病毒複製酶由它們共同結合形成的蛋白複合體,具有RNA複製酶的活性,這種複製酶複合體與病毒基因組RNA的3’端特異性序列CCCA結合,以病毒親代+ssRNA為範本合成-sSRNA,再合成子代+SSRNA。第三節病毒基因組的複製一、病毒基因組複製的主要方式病毒DNA的複製方式有多種變化、但比較常見的有3種形式:複製叉方式(包括環狀雙鏈DNA的方式)、滾環方式和鏈置換方式。1.複製叉方式所謂複製叉是指雙鏈DNA在複製原點解開成單鏈狀態,並分別以兩條單鏈為範本.互補合成新鏈,由此出現叉子狀的生長點,就稱為複製叉。***
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