微生物试验水质的检测.pptVIP

微生物水质的检测

第六小组陈睿王得和石婉莹;

采集湖泊水样

用表面取样器

每组在不同地点取小一瓶

混合六组的样本进行实验;

采样;?1.容器的选择

?由于测量的为生物样本,应使用深色玻璃瓶作为容器以减少光敏作用并减少容器对有机物质的吸附。

?2.容器的清洗规则

?容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放或产生出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学物质。

?玻璃容器,按一般清洗原则洗涤用硝酸浸泡再用蒸馏水冲洗以除去重金属或铬酸盐残留物。

?在灭菌前可在容器里加入硫代硫酸钠(Na2S2O3)以除去余氯对细菌的抑制作用。(以每125mL容器加入0.1mL的10％Na2S2O3计量。)

?3.水样的过滤

?在采样时或采样后不久,用滤纸滤膜或砂芯漏斗,玻璃纤维等来过滤样品或将样品离心分离都可以除去其中的悬浮物,沉淀、藻类。在分析时,过滤的目的主要是区分过滤态和不可过滤态,在滤器的选择上要注意可能的吸附损失。;?1.将水样充满容器至溢流并密封

?为避免样品在运输途中的振荡,以及空气中的氧气、二氧化碳对容器内样品组分和待测项目的干扰,为对水体成分产生影响,应使水样充满容器至溢流并密封保存。

?2.冷藏

?水样冷藏时的温度应低于采样时水样的温度,水样采集后立即放在冰箱或冰－水浴中,置暗处保存,一般于2～5℃冷藏,冷藏并不适用长期保存,对废水的保存时间则更短。;

水样的保存;?1水样的标签设计

?水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据实际情况，一般包括:采样目的，课题代号，监测点数目、位置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器外壁上。;?1ml移液管:每组4支共24支

?平皿:每组4板共24板四包

?200微升无菌tip头:每组15支共90支

?革兰氏染色试剂:共六套

结晶紫卢戈氏碘液95%乙醇番红染液

?40-200微升移液器、吸气器:共六套;EC肉汤培养??:胰蛋白胨20g

3号胆盐(或混合胆盐)1.5g

乳糖5g

磷酸氢二钾4g

磷酸二氢钾1.5g

氯化钠5g;共10ml*20*6=1200ml

?EC:10ml+小倒管每组20套共120套共10ml*20*6=1200ml

?伊红美蓝培养基:每组150ml共6瓶共150*6=900ml

·0.85%无菌生理盐水:每管4.5ml每组5支

共30支

共4.5*5*6=135ml---150ml;

试验流程;

MPN表参见;

?4.2初发酵试验

?将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37°C±0.5°C下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内

产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。

?4.3复发酵试验

?轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。在44.5°C±0.5°C温度下培养24h±2h(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。;

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