医学培训课件 第12章 固相膜免疫测定.pptVIP

第十二章固相膜免疫测定第一节概述一、免疫测定分类二、免疫测定原理三、固相免疫测定四、固相膜的特点五、常用的固相膜六、固相膜的技术要求第二节免疫金标记技术一、胶体金的制备第三节膜载体免疫测定的种类与原理一、膜固相免疫测定的特点二、固相微孔膜测定种类三、免疫渗滤试验和免疫层析试验四、酶联免疫斑点试验五、免疫印迹六、放射免疫沉淀试验随着免疫学技术和相关生物化学技术的发展，检测方法上派生出了多种类型的固相膜免疫快速检测试验。该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。第一节概述标记免疫测定放射免疫测定1960’酶免疫测定1970’荧光免疫测定1980’－1990’化学发光免疫测定1990’－膜固相免疫测定1990’－一、免疫测定分类二、免疫测定原理三、固相免疫测定B与F分离四、固相膜的特点多孔性毛细管作用非共价键高度吸附抗体或抗原高度敏感性易于漂洗操作简便五、常用的固相膜玻璃纤维素(fiberglass)膜尼龙(nylon)膜聚偏氟乙稀(polyvinylidenefluoride，PVDF)膜硝酸纤维素（nitrocellulose，NC）膜六、固相膜的技术要求孔径：0.2~0.6μm流速：以ml/cm2/min表示蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示均一性固相NC膜第二节免疫金标记技术(Immunogoldlabellingtechique)是以胶体金作为标记物的免疫标记技术。胶体金（colloidalgold）指金微小粒子（1－100nm）分散在溶液中所形成的金溶液。是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。也称金溶胶（goldsolution）。一、胶体金制备胶体金（colloidalgold）的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液。胶体金的制备及特性胶体金（ColloidalGold）

15~60nm胶体金结合物（Conjugate）第三节膜载体免疫测定的种类与原理固相微孔膜测定种类斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)免疫层析试验（immunochromatographyassay,ICA）斑点ELISA(dotenzymelinkedimmunosorbentassay,Dot-ELISA)酶联免疫斑点试验(enzymelinkedimmunospot,ELISPOT)免疫印迹法(immunoblottingtest,IBT)放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipitationassay,RIPA)一、免疫渗滤测定(IFA)（三）技术要点1.试剂盒组成滴金反应板、塑料小盒、吸水垫料、包被了抗原或抗体的硝酸纤维素膜、胶体金标记物、洗涤液2.操作要点孔内滴加标本，待完全滲入。孔内滴加胶体金标记抗体，待完全滲入。孔内滴加洗涤液，待完全滲入。膜中央呈现红色或粉红色斑点为阳性。斑点深浅相应提示阳性强度。IFA——双抗体夹心法测抗原GIFA技术的发展（间接法测抗体）IFA——结果判断ICAICA试剂条DICA双抗体夹心法原理图（三）技术要点1.试剂盒组成：胶体金层析条2.原理：斑点金免疫层析双抗体夹心法3.操作要点：DICA竞争法原理图ICA——间接法测抗体ICA结果观察DICA间接法原理图IFA与ICA的比较IFA穿流（FLOWTHROUGH）ICA横流（LATERALFLOW）GIFA技术的发展ICA技术的发展1990年ABBOTT公司胶体硒标记ICAUnipath公司CLEARVIEW立明衣原体彩色胶乳标记ICAROCHECardiacReaderTnT定量0.1~3ng/ml合成TnT质控点半定量测定临床应用及评