乳及乳制品中亚硝酸盐含量的测定(精)课件.pptVIP

乳及乳制品中亚硝酸盐的测定

学习目标v知识目标：v1.能解释测定亚硝酸含量原理，写出测定亚硝酸盐含量的流程和注意事项。v技能目标：v1.会正确使用分光光度计；v2.能正确绘制标准曲线；v3.能准确报告检测结果，评价亚硝酸盐含量是否符合标准。v素质目标：1.培养学生严谨、务实的学习精神；2.培养学生开拓创新、团结协作的职业素质。

检测依据GB5009.33-2010离子色谱法分光光度法乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

乳及乳制品中亚硝酸盐的测定vGB5009.33-2010-第三法

测定原理v试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在滤液中，加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度。v将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量。

具体工作任务分解任务1：仪器设备及试剂的准备任务2：样品预处理任务3：样品亚硝酸盐含量测定任务4：结果记录并分析处理任务5：填写检验报告单

任务一：仪器设备及试剂的准备v仪器v所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证不带有亚硝酸盐。v天平：感量为0.1mg和1mg。v烧杯：100mL。v锥形瓶：250mL，500mL。v比色管：50mL。v移液管：1mL、2mL、5mL和10mL。v量筒：根据需要选取。v玻璃漏斗：直径约9cm，短颈。v定性滤纸：直径约18cm。v分光光度计：测定波长538nm，使用1cm～2cm光程的比色皿。

任务一：仪器设备及试剂的准备v试剂：测定用水应是不含亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。v盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.60～9.70。v硫酸锌溶液v亚铁氰化钾溶液v显色液1：体积比为450:550的盐酸。v显色液2：5g/L的磺胺溶液。v显色液3：1g/L盐酸萘乙二胺溶液v亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的浓度为1.00μg/mL。v将亚硝酸钠在110℃～120℃的范围内干燥至恒重。冷却后称取0.150g，溶于1000mL容量瓶中，用水定容。在使用的当天配制该溶液。取10mL上述溶液和20mL缓冲溶液于1000mL容量瓶中，用水定容。每1mL该标准溶液中含1.00μg的NO。2

分光光度计的使用v（1）预热仪器将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。v为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。v（2）选定波长根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。v（3）调节T=0%轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”（此时试样室是打开的）。v（4）调节T=100%将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。

v（5）吸光度的测定将选择开关置于“A”，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。重复上述测定操作1～2次，读取相应的吸光度值，取平均值。v（6）关机实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。

注意事项v（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。v（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。v（3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。

任务二：样品预处理v一、样品的称取和溶解：v在100mL烧杯中称取10g样品，准确至0.001g。用112mL50℃～55℃的水将样品洗入500mL锥形瓶中，混匀。v二、脂肪和蛋白的去除：v按顺序加入24mL硫酸锌溶液、24mL亚铁氰化钾溶液和40mL缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇匀。静置15min～1h。然后用滤纸过滤，滤液用250mL锥形瓶收集。

任务三：乳粉亚硝酸盐含量测定v移取:20mL滤液于50mL比色管中，加水至约30mL。v在每个比色管中先加入3mL显色液1，边加边混；再加入2.5mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。加入1mL显色液3，小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。v