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ELISA原理和分类(附图解)--第1页

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一、ELISA的原理

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结

合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原

或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本

（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用

洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物

质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体

上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶

反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检

物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于

酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到

很高的敏感度。

二、ELISA的类型

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中

有三个必要的试剂：

（1）固相的抗原或抗体，即免疫吸附剂（immunosorbent）；

（2）酶标记的抗原或抗体，称为“酶联物”、“结合物”

（conjugate）；

（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体

条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的

ELISA主要有以下几种类型：

（一）双抗体夹心法测抗原

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双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

（1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结

合的抗体及杂质。

（2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成

固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

（3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体

结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标

本中受检抗原的量相关。

（4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，

测知标本中抗原的量。

在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如

HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，

就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为

抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用

单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于

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包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异

性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。

在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分

别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉

淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原

过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值

相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为

钩状效应（hookeffect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩

状效应严重时，反