芹菜大鼠肾间质纤维化干预研师姐.pptx

芹菜素对UUO大鼠肾间质纤维化的干预研究

研究生朱可可

导师杨波主任医师

南华大学附一医院2015届硕士研究生学位论文答辩会

目录

研究目的

2

实验结果

4

讨论

5

结论

6

致谢

7

实验方法

3

研究背景

1

研究背景

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础，是影响慢性肾功能不全进程的重要环节。许多细胞与分子事件参与这一过程。

主要分子事件如：促纤维化细胞因子激活

主要细胞事件如：肌成纤维细胞生成

研究背景

ERK

JNK

p38MAPK

研究背景

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是MAPKs超家族的一个亚族，通过发生自身磷酸化而活化，即形成P-p38MAPK从而发挥作用。其作为介导细胞外信号向细胞内传递的物质在肾脏纤维化中起重要作用。

芹菜素具有抗癌、抗氧化、降压、保护心脑血管等作用。许多基础实验证实芹菜素抑制p38MAPK活化是其发挥多种生物学作用的重要机制，被看作是一种p38MAPK抑制剂。

动物实验研究表明芹菜素在多种器官内具有积极的抗纤维化作用。

研究背景

芹菜素

抑制p38MAPK活化

抑制器官组织纤维化

抑制p38MAPK活化缓解肾间质纤维化？

建立单侧输尿管梗阻大鼠模型

实验目的

观察术后14天手术侧肾脏小管间质区域病理改变

检测TGF-β1、p38MAPK、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、FN、a-SMA在肾小管间质的表达，观察芹菜素对肾间质纤维化影响，并初步探讨其可能的机制。

实验方法

21只SD大鼠随机分为模型组、芹菜素组、假手术组，每组7只。芹菜素组于手术前1天开始予以芹菜素100mg/kg.d（溶于2ml生理盐水中制成悬液）灌胃至术后13天，共14天。同时模型组及假手术予以2ml生理盐水灌胃。

模型组及芹菜素组大鼠行单侧输尿管结扎建立UUO大鼠模型，步骤如下：

步骤：10％水合氯醛，按0.3ml/100g体重剂量，经腹腔注射大鼠后，于鼠背部右肋下备皮，碘伏消毒后，沿着脊柱旁从右肋下纵行切开皮肤，钝性分离皮下组织及肌层，暴露肾脏，寻找并游离输尿管，在输尿管上段行结扎输尿管，再逐层缝合皮下组织及皮肤。

假手术组模型的制作：不结扎输尿管，其余步骤与手术组一致。

实验方法

术后第14天，在10%水合氯醛腹腔注射麻醉下经心脏采血后处死动物，取右肾。检测各组大鼠血浆尿素氮（BUN）、肌酐（Scr)含量。

右侧肾脏行HE染色和masson染色，观察肾小管间质病理改变，并评估肾间质纤维化程度。

免疫组化染色检测TGF-β1、p38MAPK、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、FN、a-SMA在肾小管间质的表达。

统计学方法

使用SPSS20.0统计软件进行数据处理，实验结果以均数±标准差（X±s)表示；

组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，最小显著法（LSD）作均数间的两两比较

取ａ=0.05为检验水准，P0.05为差异有统计学意义

实验结果

表1各组大鼠尿素氮、肌酐的比较（`X±S)n=7

组别

BUN

Scr

假手术组

7.06±1.41△

39.00±2.95△

模型组

11.86±1.49*

51.11±5.10*

芹菜素组

9.59±1.43*△

45.99±2.43*▽

注：*与假手术组比较P0.01；

▽p与模型组比较p0.05△p与模型组比较p0.01

一、肾功能结果

实验结果

二、HE染色结果

假手术组HE（×200）模型组HE（×200）

芹菜素组HE（×200）

模型组大鼠肾皮质明显变薄，肾小管间质部可见大量炎症细胞弥漫性浸润、部分肾小管萎缩、部分管腔扩张、小管上皮细胞颗粒、空泡变性、间质区域增宽及间质纤维化。

实验结果

三、Masson染色结果

假手术组（×200）模型组（×200）

芹菜素组（×200）

分组

n

胶原面积（%）

假手术组

7

4.20±0.30▽

模型组

7

37.50±4.47△

芹菜素组

7

30.53±1.62△▽

注：△p与假手术组比较P0.01；▽p与模型组比较P0.01

表2各组大鼠肾间质胶原表达相对面积（`X±S）%

实验结果

四、免疫组化检测结果

各组大鼠肾组织TGF-β1免疫组织化学染色（×400）

假手术组模型组

芹菜素组