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水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素测定的液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于水产养殖环境（水体、底泥）中脱水红霉素、罗红霉素、克拉霉素、竹桃霉素、吉他霉素、交沙霉素、泰乐菌素、替米考星的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB17378.5海洋监测规范第5部分：沉积物分析

HJ494水质采样技术指导

SL187水质采样技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法原理

水试样中的目标物经HLB固相萃取柱富集和净化，底泥试样中的目标物经氨化乙腈提取，PSA和C18吸附剂净化。净化后的溶液用带有电喷雾离子源的液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

5试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯；水应为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4氯化钠（NaCl）。

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5.1.5氨水（NH3.H2O）。

5.1.6无水硫酸镁（MgSO4）

5.1.7乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）。

5.2溶液配制

5.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸0.5mL，用水稀释至500mL。

5.2.2甲酸-乙腈溶液：取乙腈30mL，用0.1%甲酸水溶液稀释至100mL。

5.2.31%氨化乙腈：取氨水5mL，用乙腈稀释至500mL。

5.3标准品

5.3.1大环内酯类抗生素：脱水红霉素、罗红霉素、克拉霉素、竹桃霉素、吉他霉素、交沙霉素、泰乐菌素、替米考星含量均≥95.0%，具体内容见附录A。

5.3.2内标：罗红霉素-D7含量≥95.0%，具体内容见附录A。

5.4标准溶液配制

5.4.1标准储备液（100μg/mL）：取大环内酯类抗生素标准品各约10mg，精密称定，用甲醇溶解并稀释至100mL，配制成浓度均为100μg/mL的标准储备液。4℃避光保存，有效期3个月。

5.4.2内标储备液（100μg/mL）：取罗红霉素-D7标准品约10mg，精密称定，用甲醇溶解并稀释至100mL，配制成浓度均为100μg/mL的标准储备液。4℃避光保存，有效期3个月。

5.4.3混合标准工作液（1.0μg/mL）：分别精密量取标准标准储备液各1mL，于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为1.0μg/mL的混合标准中间液。4℃避光保存，有效期1个月。

5.4.4内标标准工作液（1.0μg/mL）：精密量取内标标准储备液1mL，于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为1.0μg/mL的混合标准中间液。4℃避光保存，有效期1个月。

5.5材料

5.5.1HLB固相萃取柱：500mg/6mL。

5.5.2PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：粒径40μm～63μm或相当者。

5.5.3C18（十八烷基键合硅胶）吸附剂：粒径40μm～63μm或相当者。

5.5.4微孔滤膜：0.45μm玻璃纤维滤膜和0.22μm尼龙滤膜。

6仪器与设备

6.1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源。

6.2分析天平：感量0.01g和0.00001g。

6.3冷冻干燥机。

6.4涡旋混合器。

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6.5高速离心机：转速≥10000r/min。

6.6超声波清洗器。

6.7固相萃取装置。

6.8氮吹仪。

6.9旋转蒸发仪。

6.10pH计。

7样品

7.1样品采集

水样采集应符合SL187的要求。底泥样品采集应符合HJ494的要求。

7.2试样制备

采集的水样经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤后，置于样品瓶中，在0℃~4℃避光保存。采集的底泥样品经冷冻干燥机冷冻干燥后，剔除石块和植物体等异物，用研钵研磨后过60目（孔径0.25mm）网筛，在0℃~4℃避光保存。

7.3空白试样制备

选取不含大环内酯类抗生素的同类样品，按照7.2的方法制备。

8测定步骤

8.1提取

8.1.1水

量取