白腐菌实验操作.pdfVIP

工作内容：

所需仪器：恒温培养箱（微生物的试管和平板培养）、冰箱（冷冻保存）、测试分

析仪、分液漏斗、试管、烧杯、锥形瓶、电子天平、纱布、土豆200g，葡萄糖

20g，琼脂15—20g，蒸馏水1000ml、NaOH溶液0.75mol/L(提高吸附率)、丙酮、

二氯甲烷、无水硫酸钠、酵母粉、（六价铬离子溶液、二价镍离子溶液、锌离子

溶液、二价铅离子溶液、二价锰离子溶液、二价铜离子溶液、二价镉离子溶液的

等比例混合物）及其他实验室常用器具。

1.）培养白腐菌：

先配置培养基，然后培养基灭菌，然后无菌条件接种，最后在25-28度恒

温箱内培养，培养周期5-7天。要保证培养基内没其他的细菌，所以接种前先培

养基灭菌。

培养基

土豆固体培养基土豆200g，葡萄糖20g，琼脂20gPH6，蒸馏水1L,KH2PO4

3g,MgSO4*7H2O1.5g,维B18mg（称去皮的土豆小块200g，加水1000ml

慢慢煮开(20分钟)，煮至土豆小块能被玻璃棒戳碎为止，两层纱布过滤，

将滤液补足1000ml），该培养基主要用于白腐菌Phanerochaete

chrysosporium的培养和纯化以及保种。

1.制作培养基的过程

（一）称量根据用量按比例依次称取成分，常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面

皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，称量时要迅速。

（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，一加入各成分，使其溶解，

琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基

烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。

（三）调PH用1mol/LNaOH或1mol/LHCl把PH调至所需范围。

（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特

殊要求时可省去此步骤。

（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内；分装

时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。

1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需

要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长

度不超过管长的1/2。分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。

3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试

管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

（七）包扎棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。

（八）保存灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效

果，无污染方可使用。

2.高压蒸汽灭菌

1．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。

2．放回内层锅，并装入待灭菌物品（内装培养基或小的三角瓶），不要装得

太挤，以免妨碍汽流通影响灭菌效果，三角瓶口不要与桶壁接触，以免冷凝

水淋温包口的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气

槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个棉栓，使螺栓松紧一致，，勿

使漏气。3．用电炉或其他方法加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅

内的冷空气，待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而

逐渐上升，当锅内达到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。4．停

止加热，待压力表的压力降至零位时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，

取出灭菌物品。注意：当压力不为零时，不能开盖取物否则由于压力突然下

降，容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染而发生污染，甚至

灼伤操作者。5．高压灭菌锅上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得随意调节。

真空冷冻干燥菌种的恢复培养

1.安瓿管开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热器顶端，

滴加少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或镊子敲下已破裂的安瓿管

顶端。

2.菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3-0.5毫升适