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第九章核酸类药物的分析

第一节概述结构与分类理化性质

什么就是核酸？1869年核酸最早分离自外科绷带脓细胞得细胞核,当时发现这种物质含磷量之高超过当时发现得任何一种有机物,并且含有很强得酸性,故得名核酸。1909年其组成被研究清楚,1944年生物功能初步澄清,在X射线衍射技术支持下1953年结构澄清。核酸就是脱氧核糖核酸(DNA)与核糖核酸(RNA)得通称。

核酸核苷酸磷酸核苷戊糖碱基水解一、结构与分类

核酸代表戊糖,对DNA而言为脱氧核糖,对RNA而言为核糖;代表碱基代表磷酸基核苷酸

核苷酸磷酸碱基戊糖

H2OH2O碱基磷酸戊糖糖苷键酯键

核苷酸碱基连接(糖苷键)酯键(对DNA为H)1`2`3`4`5`

戊糖核糖(inRNA)2｀－脱氧核糖(inDNA)

核苷

DNARNA

大家有疑问的,可以询问和交流可以互相讨论下,但要小声点

碱基RNADNA嘧啶环嘌呤环尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶C鸟嘌呤G腺嘌呤A

类别DNARNA基本单位脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸

鸟嘌呤脱氧核苷酸

胞嘧啶脱氧核苷酸

胸腺嘧啶脱氧核苷酸腺嘌呤核苷酸

鸟嘌呤核苷酸

胞嘧啶核苷酸

尿嘧啶核苷酸碱基腺嘌呤(A)

鸟嘌呤(G)

胞嘧啶(C)

胸腺嘧啶(T)腺嘌呤(A)

鸟嘌呤(G)

胞嘧啶(C)

尿嘧啶(U)五碳糖脱氧核糖核糖酸磷酸磷酸

稀有碱基嘌呤——次黄嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、N2.N2-二甲基鸟嘌呤。嘧啶——5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、二氢尿嘧啶、4-巯尿嘧啶都就是基本碱基得化学修饰型。

鸟嘌呤次黄嘌呤1-甲基次黄嘌呤

二、理化性质(一)两性性质:磷酸基;碱基(通常:酸性)pH影响碱基间氢键稳定:DNApH4.0~11、0(二)水解性:微溶于水,不溶于一般得有机溶剂(三)UV:λmax=260nm蛋白质280nmA260/A280纯DNA＞1、8纯RNA应达到2、0混有杂蛋白比值降低

(四)变性与复性1.变性:在某些理化因素影响下,DNA双螺旋区得氢键断裂与碱基堆积力破坏,有规律得双螺旋结构变成单链无规律得“线团”,但不发生共价键得断裂,这过程称之。变性原因:高温(一般＞75℃)、强氧化剂、强酸、碱、尿素等;机理:双链间氢键断开,成为两条单链(DNA双螺旋二级结构得破坏,生物活性得丧失)特征性Tm---DNA得变性温度82~95℃

2.复性一定条件下,去除变性因素后,核酸恢复二级结构及生物活性得现象;通常使用热复性。(退火)高温变性缓慢冷却热复性急速冷却复性失败热复性在基因测序中被广泛应用

(五)颜色反应苔黑酚反应:RNA中核糖+浓HCl(浓H2SO4)→糠醛+苔黑酚→深绿色化合物(λmax=670nm)二苯胺反应:DNA中脱氧核糖+浓H2SO4→5-羟基-4-羰基戊醛+二苯胺→蓝色化合物(λmax=595nm)水解后磷酸:磷酸+钼酸→磷钼酸+还原剂(维生素C.氯化亚锡等)→钼蓝(λmax=660nm)Fe3+脱水

第二节嘌呤类核苷酸药物分析嘌呤碱(腺嘌呤、鸟嘌呤)戊糖磷酸

一、鉴别戊糖鉴别嘌呤鉴别磷酸鉴别特征吸收光谱熔点测定

(一)戊糖得鉴别苔黑酚反应(地衣酚反应)---凡核糖均有此反应试剂:浓盐酸,苔黑酚试剂,三氯化铁(催化剂)现象:鲜绿色二苯胺反应DNA试剂:浓硫酸,二苯胺现象:蓝色与间苯三酚反应(核苷酸中得戊糖)现象:玫瑰红色

(二)嘌呤得鉴别+氨制硝酸银→白色↓→红棕色(遇光)(嘌呤碱基得特殊鉴别反应)

(三)磷酸得鉴别有机磷→无机磷+钼酸→磷钼酸+还原剂→钼蓝

(四)特征吸收光谱UV:嘌呤环,嘧啶环IR

(五)熔点测定

二、检查一般检查酸度,水分,无机盐,有机物,溶液得颜色与澄清度蛋白质检查磺基水杨酸溶液有关物质纸色谱,薄层色谱,电泳,荧光检查

三、含量测定紫外-可见分光光度法现在国家已经批准得嘌呤类核苷酸药物一般都用此法测定含量HPLC

四、实例分析肌苷ATP

(一)肌苷得质量分析1、结构:C10H12N4O5268、23本品为9β-D-核糖次黄嘌呤。按干燥品计算,含C10H12N4O5应为98、0～102.0％。2.性状:本品为白色结晶性粉末;无臭,味微苦。本品在水中略溶,在氯仿或乙醇中不溶,在稀盐酸与氢氧化钠溶液中易溶。

3.鉴别取0、01％供试品溶液适量,加等体积得3,5-二羟基甲苯溶液(取3,5-二羟基甲苯与三氯化铁各0、1g,加盐酸使成100ml),混匀,在水浴中加热约10分钟,即显绿色。---苔黑酚反应取本品1％水溶液,加氨制硝酸银试液数滴,即产生白色胶状沉淀。---嘌呤碱基