DB23T 3767-2024 奶牛趾间皮肤外植体构建技术规程.docx

ICS65.020.30

23CCSB44

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黑 龙 江 省 地 方 标 准

DB23/T3767—2024

奶牛趾间皮肤外植体构建技术规程

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2024-08-30发布 2024-09-29实施

黑龙江省市场监督管理局??发布

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前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省农业农村厅提出。

本文件起草单位：黑龙江八一农垦大学、东北农业大学、黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院。

本文件主要起草人：郑家三、刘云、邵广、张鹤飞、周志新、葛延松、徐恩爽、韩欢胜、王峥、孙悦、杨春雪、田雪。

引 言

近年来，在市场和政策的推动下，以及地处北纬43～53°世界公认的黄金“奶牛带”这一得天独厚的资源优势，黑龙江省奶牛规模养殖发展速度迅速，随之而来的是一些奶牛群发生产疾病特别是奶牛肢蹄病的发病率呈上升趋势，对我省奶牛养殖行业的健康发展造成了巨大的威胁。在奶牛肢蹄病中蹄病发病率约占90%以上，根据表现形式可分为感染性和非感染性两类，常见的感染性蹄病主要包括腐蹄病、蹄趾皮炎和趾间皮炎等，奶牛蹄病一直是困扰奶牛健康养殖的难题，深入阐明奶牛蹄病的病原易感性及其炎症发生机制是十分必要的。以往对奶牛蹄部感染性疾病的研究往往采用活体实验，不仅给实验带来诸多不便，而且实验成本高昂，更重要的是违背动物福利原则，因此寻找一种可替代的离体实验模型具有重要的现实意义，基于以上目的，本文件提出构建奶牛趾间皮肤外植体。

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奶牛趾间皮肤外植体构建技术规程

范围

本文件规定了奶牛趾间皮肤外植体的来源、采样、构件材料、活性检测方法、构建成功评定方法的要求。

本文件适用奶牛趾间皮肤外植体的构建。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB16568-2006 奶牛场卫生规范

DB2306/T096-2019 《奶牛蹄部疾病诊断技术规程》

DB23/T1618-2015 奶牛蹄保健技术规范

DB61/T367.16-2022 荷斯坦牛生产技术规范第16部分：肢蹄病防治GB/T27830-2011 化学品体外皮肤腐蚀人体皮肤模型试验方法

SN/T4577-2016 化妆品皮肤刺激性检测重建人体表皮模型体外测试方法JY0315-1991 皮肤结构模型技术条件

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

皮肤外植体

从活体动物切取下来进行培养的皮肤组织。

要求

外植体皮肤来源要求

以新屠宰的奶牛后蹄趾间皮肤为外植体皮肤来源。

外植体所用的皮肤需从无蹄部疾病且蹄型结构良好的奶牛后蹄蹄叉处采集。

人员要求

具有扎实的兽医外科专业知识，且熟练掌握兽医外科手术操作技能。

熟练掌握组织/细胞培养技术。

熟练掌握病理组织学和免疫组织化学技术并具有分析病理组织切片的能力。

采样要求

使用的外科手术器械应经过严格消毒、灭菌。

样品采集过程保证无菌操作。

奶牛趾间皮肤外植体构建材料

主要材料

奶牛趾间皮肤外植体构建所用耗材见附录A。

主要设备

奶牛趾间皮肤外植体构建所用主要设备见附录B。

奶牛趾间皮肤外植体构建方法

培养基配制

运输培养基

每100mL运输培养基中，含有青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（100×）1mL、L-谷氨酰胺溶液1mL、5μg/mL硫酸庆大霉素9μL，余量为DMEM/F121:1培养基。

洗涤培养基

每100mL洗涤培养基中，含有青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（100×）1mL、2μg/mL硫酸庆大霉素4μL，余量为DMEM/F121:1培养基。

组织培养基

每100mL洗涤培养基中，含有青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（100×）1mL、L-谷氨酰胺溶液1mL、5μg/mL硫酸庆大霉素10μL，胎牛血清10mL，DMEM高糖培养基65.993mL，余量为DMEM/F-121:1培养基。

样本的采集

选取无蹄部疾病且蹄型结构良好的新屠宰奶