Illumina测序介绍课件.pptx

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2024-09-26 发布于广东
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Illumina测序技术概述

课程结束时：清楚了解Illumina测序流程中的主要步骤能够描述簇生成（ClusterGeneration）的过程理解边合成边测序（SequencingbySynthesis）的原理课程目标

IlluminaSequencingWorkflow1LibraryPreparationcBotMiSeqNextSeqHiSeq2500-Rapid2ClusterGenerationHiSeqHiScanSQGAIIxMiSeqNextSeq3Sequencing4DataAnalysisICS/RTACASAVAMSRBaseSpaceIllumina测序流程文库制备簇生成测序数据分析

文库制备的目的是在需要测序的DNA片段两端加上能够与测序仪配合的接头序列（Multiplexed,SR,PE）双端标签文库文库制备是决定测序实验成功与否的关键步骤①①①与流动槽（FlowCell）结合的区域②②②Read1和Read2测序引物结合的区域③③插入片段④④④标签序列区域（Index）

WhatisaFlowCell?Eachlaneisrandomlycoatedwithalawnofoligosthatarecomplementarytolibraryadapters每条通道中都随机植入了能与文库接头互补结合的大量短DNA片段Clustergenerationoccursonaflowcell簇生成在流动槽（flowcell）上完成流动槽(FlowCell)是什么?Aflowcellisathickglassslidewithchannelsorlanes一种含有通道的厚玻璃片

簇生成SingleDNALibrary单个DNA文库分子AmplifiedClonalCluster扩增后的DNA克隆簇cBotSequencer

HybridizeFragmentExtendAdaptersequence接头序列3’extension3’延伸Surfaceofflowcellcoatedwithalawnofoligopairs流动槽表面随机植入了大量引物链SingleDNAlibrariesarehybridizedtoprimerlawn变性后单链DNA文库与流动槽上的引物杂交Boundlibrariesarethenextendedbypolymerases随后在DNA合成酶的作用下，结合上的DNA文库进行延伸片段杂交与延伸

Newlysynthesizedstrand新合成链Originaltemplate原始模板链DenatureDouble-StrandedDNADiscard洗去丢弃Double-strandedmoleculeisdenatured双链DNA分子被变性Originaltemplatewashedaway原始的模板链被洗去Newlysynthesizedstrandiscovalentlyattachedtoflowcellsurface新合成的DNA链以共价键连接的方式结合在流动槽表面双链DNA变性

NOTE:SinglemoleculesbindtoflowcellinarandompatternNOTE:单个DNA分子以随机的方式与流动槽表面结合Single-StrandedDNA单链DNA

BridgeAmplificationSingle-strandedmoleculefli

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