Illumina-测序的原理和应用PPT课件.pptx

Illumina测序的原理和应用1精选ppt2021必威体育精装版

Illumina测序流程DataAnalysis数据分析Sequencing测序ClusterGeneration簇生成LibraryPreparation文库制备测序流程2精选ppt2021必威体育精装版

AdapterandLibrary接头和文库接头：与flowcell结合区Read1和Read2测序引物结合区Index用来区分不同样本3精选ppt2021必威体育精装版

Illumina测序流程DataAnalysis数据分析Sequencing测序ClusterGeneration簇生成LibraryPreparation文库制备测序流程4精选ppt2021必威体育精装版

什么是flowcell？Flowcell即流动槽，如载玻片大小，有8个通道即8条lane。5精选ppt2021必威体育精装版

1.SingleDNAlibrariesarehybridizedtoprimerlawnandextendedbypolymerase6精选ppt2021必威体育精装版

2.Double-strandedmoleculeisdenaturedandoriginaltemplateiswashedaway7精选ppt2021必威体育精装版

3.Newsynthesizedstrandiscovalentlyattachedtoflowcellsurfacetoformabridgeandextendedbypolymerase4.Double-strandbridgeisformed8精选ppt2021必威体育精装版

5.Double-strandbridgeisdenaturedandformtwocopiesofcovalentlyboundsingle-strandedtemplates6.Bridgeamplificationcyclerepeat9精选ppt2021必威体育精装版

MultiplebridgesareformeddsDNAbridgesaredenaturedandreversestrandsarecleaved10精选ppt2021必威体育精装版

9.Cleavedreversestrandsarewashedawayandleavingaclusterwithforwardstrandsonly在Illumina的测序过程中，无论是单端测序还是双端测序，都会用到特异选择性链切断的过程。其中单端测序的要切断1次，双端测序中的两条链要先后各切断1次（共2次）。单端测序：高碘酸希夫反应。双端测序：Illumina巧妙地利用了“甲酰胺基嘧啶糖苷酶（Fpg）”对“8-氧鸟嘌吟糖苷（8-oxo-G）”的选择性切断作用。11精选ppt2021必威体育精装版

Illumina测序流程DataAnalysis数据分析Sequencing测序ClusterGeneration簇生成LibraryPreparation文库制备测序流程12精选ppt2021必威体育精装版

Hiseq2500Twoflowcell13精选ppt2021必威体育精装版

10.Sequencingprimerishybridizedtoadaptersequence测序引物3‘端5‘端14精选ppt2021必威体育精装版

11.Onlyonenucleotideisaddedeverycycleasthe3’endisblocked15精选ppt2021必威体育精装版

12.Cleavethefluorandfreethe3’endthenrepeatabovestepsfornextcycle16精选ppt2021必威体育精装版

13.Sequencedstrandisstrippedoffandtheindexprimerisaddedfortoseqindex3‘端5‘端Indexprimer17精选ppt2021必威体育精装版

14.Repeatbridgeamplificationtoformreversestrandafterindexsequencing15.