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第一篇细胞生物学;第一章医学细胞生物学概论;第一节
医学细胞生物学研究内容;第二节
医学细胞生物学研究方法;一、显微技术;普通光学显微镜;荧光显微镜;荧光显微镜照片
(微管呈绿色、微丝红色、核蓝色);激光共聚焦扫描显微镜;蓝色为细胞核
绿色为微管;暗视野显微镜;?????;微分干涉差显微镜;倒置显微镜;透射电子显微镜;RER形态;显微操作/注射仪;二、生物化学与分子生物学技术;免疫细胞化学
依据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,反抗原进行定位测定技术。
假如将抗体结合上标识物,再与组织中抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中部位。
惯用标识物有荧光素和酶。
荧光素标识称为免疫荧光法
酶标识称为酶标免疫法;显微光谱分析技术
细胞中有一些成份含有特定吸收光谱,核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性吸收曲线。比如,核酸吸收波长为260nm,而蛋白质则为280nm。依据细胞成份所含有这种特征,可利用显微分光光度计对一些成份进行定位、定性,甚至定量测定;放射自显影术
用于研究标识化合物在机体、组织和细胞中分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。
原理是将放射性同位素(如14C和3H)标识化合物导入生物体内,将标本制成切片或涂片,涂上卤化银乳胶,组织中放射性即可使乳胶感光。显示还原黑色银颗粒,即可得知标本中标识物准确位置和数量。;分子杂交技术
含有互补核苷酸序列两条单链核苷酸分子片段,在适当条件下,经过氢键结合,形成DNA-DNA,DNA-RNA或RNA-RNA杂交双链分子。
这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否含有互补关系。;人类染色体
端粒DNA
荧光原位杂交;PCR技术
聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)用于在体外将微量目标DNA大量扩增,方便进行分析。;三、细胞分离技术;离心技术--差速离心;用差速离心法分离已破碎细胞各组份;?A等速度沉降,B等密度沉降;流式细胞术
流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选一门技术。
在分析或分选过程中,包在鞘液中细胞经过高频振荡控制喷嘴,形成包含单个??胞液滴,在激光束照射下,这些细胞发出散射光和荧光,经探测器检测,转换为电信号,送入计算机处理,输出统计结果,并可依据这些性质分选出高纯度细胞亚群,分离纯度可达99%。
包被细胞液流称为鞘液,所用仪器称为流式细胞计。;30/35;细胞电泳
在一定PH值下细胞表面带有净正或负电荷,能在外加电场作用下发生泳动现象称为细胞电泳。
引发细胞电泳电位值称为ξ电位。
各种细胞或处于不一样生理状态同种细胞电荷量有所不一样,故在一定电场中泳动速度不一样,所以可用来分离不一样种类细胞。
在恒定电场条件下,同种细胞电泳速度相当稳定,因而可经过测定电泳速度来推算出细胞ξ电位。ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异,所以在诊疗疾病上有一定价值。;四、细胞培养与细胞杂交;动物细胞培养;植物细胞培养;正常淋巴细胞含有分泌抗体能力,但不能在体外长久培养,瘤细胞能够在体外长久培养,但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein1975将两种细胞杂交而创建了单克隆抗体技术,获1984年诺贝尔奖。
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