T_BPMA 24-2024 生活饮用水中诺如病毒定量检测 实时荧光PCR方法.docxVIP

ICS07.100.20CCSC51

BPMA

北京预防医学会团体标准

T/BPMA24—2024

生活饮用水中诺如病毒定量检测实时荧光PCR方法

QuantitativedetectionofNorovirusindrinkingwater—Real-timePCRMethod

2024-04-23发布2024-04-23实施

北京预防医学会发布

T/BPMA24—2024

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由北京市通州区疾病预防控制中心提出。

本文件由北京预防医学会归口。

本文件起草单位：北京市通州区疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、北京市疾病预防控制中心、北京市朝阳区疾病预防控制中心、北京市丰台区疾病预防控制中心、北京市怀柔区疾病预防控制中心、北京市昌平区疾病预防控制中心、北京市大兴区疾病预防控制中心

本文件主要起草人：高翔、张晓、李晓辉、钱城、赵剑虹、秦萌、姬莉莉、舒高林、王希峰、王艳春、杨冬梅、赵春艳、王建国、刘波、邢方潇、孙灵利、高艳青、邹林、张萍、甄博珺、高洁、周景林、李冬梅、侯宛祺、邓富昌、侯敏、郑旭、周少磊、张建明、崔燕、郑燃燃、郭晓晨、赵凤玲、罗宇馨、韩桃利、颜涛、王艺錞、马琳、李东迅、彭华、银安琪、黄震、王润萍、刘杨、常馨、李秋虹、邵春昕、王凤君

T/BPMA24—2024

2

生活饮用水中诺如病毒定量检测实时荧光PCR方法

1范围

本文件描述了生活饮用水中诺如病毒富集和实时荧光定量检测方法。

本文件适用于市政管网末梢水、二次供水、自备井水中诺如病毒GI/GII群的定量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5750.2生活饮用水标准检测方法水样的采集与保存

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

诺如病毒Norovirus，NoV

杯状病毒科，诺如病毒属，分子结构为单股正链RNA病毒，基因组长度为7kb~7.5kb，病毒直径约为26nm~35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称。

注：诺如病毒分10个基因群GI~GX，GI、GII是引起人类急性胃肠炎的两个主要基因群。

4设备和材料

4.1实时荧光PCR仪。

4.2微生物快速富集系统：配套使用中空纤维型滤膜，孔径0.05μm。

4.3涡旋振荡器。

4,4核酸提取仪。

4.5微量移液器及其无RNase带滤芯移液器吸头：10μL、20μL、200μL、1mL。

4,61.5mL无RNase离心管、无RNasePCR管或PCR板。

5试剂

5.1诺如病毒GI/GII基因组引物、探针如下：诺如病毒GI基因组引物、探针：

GI上游引物：5’-CGCTGGATGCGNTTCCAT-3’

GI下游引物：5’-CCTTAGACGCCATCATCATTTAC-3’

GI探针：5’-VIC-TGGACAGGAGAYCGC-MGB-3’诺如病毒GII基因组引物、探针：

GII上游引物：5’-ATGTTCAGRTGGATGAGRTTCTCWGA-3’

GII下游引物：5’-TCGACGCCATCTTCATTCACA-3’

GII探针：5’-FAM-AGCACGTGGGAGGGCGATCG-BHQ1-3’

T/BPMA24—2024

3

5.2RNA提取试剂盒。

5.3一步法RT-qPCRMix（Taqman）试剂盒。

注：可选用诺如病毒核酸检测试剂盒。

5.4诺如病毒核酸标准品试剂盒：线性化标准质粒。如：

a)GI诺如病毒(GenBank登录号m87661)的5291~537686bp；

b)GII诺如病毒病毒(GenBank登录号x86557)的5012~510089bp。

6检测步骤

6.1采样

水样采集按照GB/T5750.2执行，采样