免疫分析说课稿公开课一等奖课件省赛课获奖课件.pptx

第八章免疫分析(三);;8.4.1荧光标记物

FIA就是把某些强荧光的化合物用作标记试剂。惯用的荧光标记物涉及：;香豆素类(Coumarins)标记物

;8.4.2在生物体液中进行荧光测定的局限性;(3)淬灭效应

血清中的蛋白质、胆红素及血红蛋白等能够吸取激发或发射光的能量而产生淬灭现象。荧光标记的抗原与血清蛋白的结合也会产生荧光淬灭。

(4)光漂白作用

当荧光分子受到激发光的持续照射时会产生光分解而使得荧光强度减小，特别是当激发光的波长短，而激发光的强度又非常大时更是这样(如采用激光光源时)。;8.4.3荧光免疫分析的仪器;8.4.4荧光免疫分析法示例;TRF分析法的优点：

标记物体积很小(为原子标记)，标记后不会影响被标记物的空间立体构造，确保了被检测物质的稳定性(特别对蛋白质影响更小)；

实现了多位点标记，这不仅使检测更敏捷，也使一种试剂盒能够同时检测出两种或两中以上的项目（如前列腺特异抗原PSA的检测）；

现在只有原子标记才干精确的定量检测DNA、RNA。;稀土原子含有的荧光发射峰谱范畴窄、激发光波长范畴宽的特点，有助于增强荧光的特异性，提高分辨率；激发光和发射光之间存在较大的STOKES位移(激发光与发光之间的能量差)，有助于排除非特异性荧光的干扰、减少本底荧光强度；稀土离子螯合物产生的荧光强度高、寿命长，有助于消除环境中其它荧光物质的影响，并可对样品进行多次检测。;时间分辨荧光免疫分析技术含有标记物制备简便、使用期长、不污染环境、操作流程短、原则曲线线性范畴宽、使用期长、应用范畴十分广泛等优点。即使问世仅十余年，但在办法学研究和应用方面均发展快速。国外(如：WALLAC公司)已有商品化试剂盒40余种，荧光测试仪研制已进入第三代，分析技术也已实现高度自动化。;8.5免疫分析发展趋势;从发展的趋势来看，在此后比较长的一段时间内，酶免疫分析法将仍占主导地位，特别是在应用方面更将是如此；而在研究方面，下列诸方面的工作将有待于进一步拓展和进一步。;8.5.1基因工程抗体;抗独特型抗体(Anti—idiotypicantibody)

免疫系统的抗独特型反映能够造成产生一类特殊的???体－抗独特型抗体。通过单克隆抗体筛选可得到?、?和γ等型抗体。抗独特型抗体的特点是其结合位置是独特型抗体的抗原结合位点，即抗独特型抗体的结合反映性质类似抗原。其中?型反映性与抗原完全相向，可与抗原对独特型抗体进行等结合位点的竞争结合，因而在现在分析中应用较多。例如，运用雌二醇受体的抗体的结合位点可模拟雌二醇的构造，两者互相竞争，可用于测定雌二醇。;双特异性抗体(Bispecificantibody)

由于抗体是由四条肽链构成(HL2)型构造，因此通过两个不同单克隆抗体细胞系的二次融合杂交和抗体筛选便可得到含有两个不同的抗原结合位点的抗体(L1H1-L2H2型)。这就是双特异性抗体。

双特异性抗体的一种有趣的特点是抗体的两个结合位点含有一定的协同作用，除了研究意义外，双特异性抗体的这种协同作用已被用来设计均相免疫分析法。;双功效抗体(Bi-functionalantibody)

双功效抗体重要是通过基因工程的办法，将酶结合到抗体重链部分的恒定区，使抗体同时含有酶的功效。其特点在于抗体酶标记的效率达成100％。;8.5.2生物素-亲和素体系的多重标记;为了避免标记对抗体结合活性的影响．同时也能够进一步提高探针的偶联数量，需要采用多重标记的办法。在诸多办法中，以应用生物素-亲和素反映对的办法备受崇。

;生物素—亲和素标记系统的优势在于：

1.试剂来源广泛和较易提取，

2.生物素与亲和素结合速度较快并且结合物的稳定性高；

3.生物素分子易于活化，然后再与蛋白质分子相偶联，生物4.素标记能够达成较高的偶联率而不影响抗体的生物活性；

5.生物素—亲和素标记体系有灵活多变的运用方式，以适应不同的分析设计；

6.标记体系采用分别标记的办法(生物素标记抗体，探针标记亲和素)，通过探针标记的亲和素使之成为通用试剂，非常适合于试剂的商品化。;8.5.3自动化免疫分析法;70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反映在几十秒内出成果，能够说是免疫化学测定的革命的发展

随着标记技术的发展，免疫化学能够纳入临床化学检查范畴

现在，自动化免疫分析系统发展快速

自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，含有高特异性；手段多是运用标记技术而将检测信号放大，含有高敏捷度。;自动化免疫仪器种类（应用技术）;免疫比浊;散射免疫比浊分析法;免疫透射比浊;胶乳浊度测定法;;影响免疫比浊的因素;自动免疫浊度分析仪的规定;化学发光自动免疫分析;