- 1、本文档共4页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
WATERS高效液相的标准操作规程(SOP)
1流动相的处理
1.1过滤溶剂
溶剂在使用前要用过滤器过滤,有机相和纯水相通常可以不过滤,
如果使用固体化学试剂(缓冲盐)配制流动相,过滤特别重要,不能
让固体微粒污染泵,阻塞进样器和柱头过滤片。同时一些缓冲盐溶液
过夜后易生菌,使用前要抽滤或者重新配制。实验室应有水溶性和脂
溶性两种过滤膜供选择(反光面朝上),过滤水相时,要先用1-2ml
水润湿过滤膜,有助于快速抽滤。
1.2保持储液瓶的清洁
用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子,最后一次应用
HPLC级的水或溶剂清洗,不能在清洗过程中留下污迹。流动相瓶子
要保持清洁。
1.3保证溶剂的质量
一定要用HPLC级的溶剂,水也应达到HPLC级,同样也要使用
高纯度的缓冲盐。
1.4故障及解决方法
1.4.1流动相脱气不充分
流动相受热,或者流动相不同组分混合时会有气体产生,气泡进
入泵内引起压力波动,增加噪音,色谱图上出现毛刺。可试用下列方
法解决问题:a、流动相再脱气;b、采用更有效的脱气方法(如抽滤)
或两种方法配合使用;c、改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2流动相供给不畅
流动相用完,管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液
器中流动相的量,加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上
装滤头沉至瓶底,储液器盖上留一小孔正好夹住进液管,使其不能上
下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡,压力不稳。压力不稳时,
如果已经排除流动相混合不均匀的状况,则观察滤头外部是否长毛
(一般水相滤头易长毛),去掉过滤器后如果系统运转正常,说明已
找出问题,是过滤器被微粒所阻塞或长霉。解决方法:a、换上新的
过滤器(滤头)。b、将滤头拆下,先用纯水超声15min,再换50%甲
醇水溶液超声,再换纯甲醇超声,如果是水相的滤头,在安装前还需
要用纯水超声。如果上述还不能解决问题,则使用10%稀硝酸水溶液
超声滤头,可起到除去菌类微生物的作用。
1.4.3检测器和流动相管路被污染
由于污染,噪音越来越大,检测器被污染。解决方法:拆下柱子
装上双通,分别用纯水、50%甲醇、纯甲醇冲系统,如果基线仍然噪
音很大,则改用异丙醇冲系统(两个泵分开冲),冲完要分别用纯水
和有机相顶去两个泵里的异丙醇。
一些缓冲盐流动相易生菌,长时间使用会使流动相管路滋生微生
物,所以仪器长时间不用最好让水相的泵用50%甲醇冲,如果系统内
生长了微生物,可用稀硝酸冲洗既可(注意不要损坏柱和管道系统)
真空脱气时防止泵油带入流动相。用清洁的惰性塞子、搅棒、过
滤器和玻璃器皿配制流动相。已经污染的流动相一定要废弃掉。
2高压输液泵的操作
2.1液相色谱系统泵的流速在0.1-10.0ml/min之间,要保持泵的良好
操作性能,必须维护系统的清洁,保证溶剂和试剂的质量,流动相的
过滤和流动相的脱气。下面列出预防泵故障的注意事项:(1)用高质
量的试剂和HPLC级溶剂;(2)过滤流动相和溶剂;(3)脱气;(4)
工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇/水的混合溶剂冲洗柱塞
杆;(5)不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中;(6)定期更换垫圈;(7)
加润滑油。处于良好操作状态的泵,应该使色谱图上的基线平稳,保
留时间的重复性良好。等度洗脱时压力波动小于±2%。梯度洗脱时
压力变化应是缓慢和平稳的。
2.2常规准备工作包括:开通电源,溶剂脱气,泵头及溶剂管路除
气泡及泵的启动。
2.2.1接通系统电源,控制器开通后进行自检,数秒后通过,接受操
作指令。
2.2.2溶剂瓶脱气(purge)
2.2.3编写等度(Isocratic)或梯度(Gradient)洗脱程序,以初始梯
度(等度)比例平衡柱子10min,待系统平衡后开始实验。
注意,使用含缓冲盐的流动相时,一定要用纯水相过渡。如用磷酸盐
缓冲液作为水相,以30%水相-70%有机相等度洗脱时,要先用30%纯水
-70%有机相平衡15min左右,再换上含盐水相。这是因为做完实验冲
柱子时,柱子最后要保存在80%有机相中,如果第二天一接上柱子就
换上含盐流动相,容易使盐在柱子中析出,造成柱压急剧升高,损坏
柱子。梯度洗脱也是如此,要先用纯水相-有机相以初始梯度比例平
衡柱子再换上含盐流动相。
3实验结束对柱子进行冲洗,如使用了含盐的流动相,要先用等比
例或者是水相稍高的比例将柱子中的盐洗
您可能关注的文档
最近下载
- 安全风险管控清单(样表).docx VIP
- NBT 32047-2018光伏发电站土建施工单元工程质量评定标准.docx
- 新建固体废物填埋场项目施工组织设计.doc
- 2022高二上期中(全国卷统考)-语用综合-选择+简答和答案详解.pdf
- 2024延长石油(集团)限责任公司社会招聘【综合基础知识500题】高频考点模拟试题及参考答案解析.docx
- 2025届高考语文一轮复习:正确使用修辞.pptx VIP
- 整县屋顶分布式光伏项目工作方案.docx
- 2024数字经济与驱动发展试题及答案.docx
- 作文考试专用稿纸-(A3完美打印版).doc
- GTCC-065-2019 铁路碎石道砟(可复制版).pdf
文档评论(0)