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吉林大学家级生物实验教学示范中心实验报告

姓名：周秀丽课程：生物化学实验题目：啤酒酵母蔗糖酶提取、分离纯化、性质鉴定及反应动力学实验

学号时间：2013/5/24-27温度：湿度：地点：C462教师签字：

一、实验目的：

1、熟悉工曲线的制方法及注意事项；

2、掌握3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色定糖的原理和方法；

3、掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；

4、掌握酶蛋白分离提纯的原理；

5、掌握酶的比活力测定及其计算方法；

6、掌握酶促反应动力学中用双倒数法测定Km的方法；

7、运用正交试验法确定温度、pH值、离子浓度的最适条件。

称量技术：

1、了解电子天平的用途

2、了解电子天平的工原理

3、掌握电子天平的使用方法

4、掌握电子天平使用前后的注意事项

离心技术：

1、了解离心机的基本原理和用途

2、了解离心机的类型和用途

3、了解离心机的型号和控制版面

4、掌握离心机的使用方法

5、掌握离心机使用的注意事项

层析技术：

1、了解层析技术的基本原理

2、了解层析技术的分类情况

3、了解各种层析技术的原理

4、掌握胶层析技术

光谱分析技术：

1、学习掌握紫外可见、荧光、红外光谱分析技术原理

2、了解仪器结构和分类

3、熟练掌握常用仪器的使用方法和注意事项

电泳技术：

1、了解电泳的基本原理

2、了解电泳的类型

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吉林大学家级生物实验教学示范中心实验报告

姓名：周秀丽课程：生物化学实验题目：啤酒酵母蔗糖酶提取、分离纯化、性质鉴定及反应动力学实验

学号时间：2013/5/24-27温度：湿度：地点：C462教师签字：

3、学习SDS测定蛋白质分子量的原理

4、掌握垂直板电泳的操技术

5、掌握琼脂糖胶电泳的操技术

6、了解转移电泳的基本原理和操方法

7、了解双向电泳的基本原理和操方法

二、实验原理：

1、蔗糖酶的提取：

①酵母菌的基本特征：

单细胞，椭圆形、圆形或柱形。长5-30μm，宽1-5μm。

②生物材料破碎方法：

（1）机械（匀浆）法

①研钵

②玻璃或Teflon研棒匀浆器（50mL）Teflon：聚四氟乙烯

先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度

比高速组织捣碎机高，适用于少量组织和脏器。

③高速组织捣碎机（0.5-1L）

将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，

逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。

④高压匀质机（XL）

高压下的细胞通过阀门流出时，细胞内外压力同时降低，但由于细胞膜的用，胞外压力瞬间降至

常压，而胞内压力相比之下降低较慢，从而在细胞内外形成压力差，使细胞膜破裂。

优点：快速，产热小，对蛋白损伤小，破碎效率高。一次破碎效率可达90%以上

（2）超声波处理法

用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，常在30至

60Hz频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。

（3）反复冻融法

将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内的水形成冰粒而剩余的细胞液中盐浓

度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。设备简单、效率不高，时间长，注意蛋白酶！

（4）化学处理法

有些动物细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。

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吉林大学家级生