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间接ELISA法测定抗人血清白蛋

白效价

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间接ELISA法测定抗人血清白蛋白效价

作者：ZP（成都医学院检验医学院09

级医学检验本科二班，610500）

【摘要】目的通过运用间接ELISA法，来测定抗人血清白蛋白的效价。方法用抗原、酪蛋白分别包

被、封闭微孔板，再加入待检血清、一抗、二抗，建立间接包被模式酶联免疫法。经方阵滴定确定抗

原和酶标抗体的最适浓度后，测定抗体效价。结果在包被的人ALB浓度为0.1ug/ml，二抗1：20000的

稀释倍数时，测出的抗人ALB的效价范围为1：51200。结论运用间接ELISA法，在检测抗人ALB的灵敏

度高，优化了反应条件，可用于初步抗人ALB的检测。

【关键词】间接ELISA；抗人血清白蛋白；效价；羊抗人ALB、兔抗羊IgG-HRP

间接ELISA法，是目前最常用的方法，因其灵敏度高，操作简便而被运用

广泛。此方法是测定抗体最常用的方法，属于非竞争结合试验。

其原理是将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合成固相抗原-

受检抗体复合物，再用酶标二抗与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗

原-受检抗体-酶标二抗复合物，测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。

此次试验就是用间接ELISA测定未知的抗人ALB的效价。

1、主要试剂、仪器、材料及主要溶液的配制

1.1主要试剂：人ALB标准品（250mg/支）；一抗(羊抗人ALB，效价1:701ml/

瓶，批号：201106贮存于4～20℃，有效期：2年)；二抗(兔抗羊IgG-HRP，购

自武汉博士德生物工程有限公司)；显色剂：A液、B液，ME002可溶性TMB显

色液；终止液（2MH2SO4）；包被液：0.05MPH9.6碳酸盐缓冲液；洗涤液

0.05%TWEEN-PBS；PBS缓冲液0.1MPH7.4；封闭液1%酪蛋白-PBST.

1.2仪器：洗板机（BIO-RADMODEL1575）、孵箱（上海-恒科学仪器有限公司型

号：DHP-9272）、SM-3自动化酶免疫分析仪（北京天石医疗用品制作所）

1.3材料：96孔酶标板、一次性塑料试管、加样枪（上海求精生化试剂仪器

有限公司）

1.4主要溶液的配制：1)、0.05Mol/LPH9．6的碳酸盐缓冲液（包被稀释液）：

准确称取1.6g碳酸钠，2.9g碳酸氢钠于烧杯中加水适量使溶解，用去离子水定

溶于1L的容量瓶中，同时调节PH值至9.6；2)、PH7.4PBS缓冲液:准确称取

氯化钠8g，氯化钾0.2g，十二水和磷酸氢二钠3.58g，磷酸二氢钾0.2g于烧

杯中，用去离子水定溶于1L的容量瓶中，同时调节PH值至7.4；3)、封闭液

1%酪蛋白-PBS-T：准确称取3g酪蛋白于以洁净烧杯中，再加入300mlPBS溶液

和150ulTween20。将烧杯置于电炉上边搅拌边加热，直至酪蛋白完全溶解；

4)、洗涤液0.05%TWEEN-PBS：向1000mlPH7.4PBS缓冲液中加入500μl

Tween20。PBS-T既是洗板液也是溶解封闭剂酪蛋白（1%）的溶解试剂，配方为

PBS+Tween20.