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微生物检测注意事项

一、接种与分离方法

根据待检样品的性质、培养目的和所用培养基的种类，采用不同

的接种方法。

1.平板划线分离培养法

对混有多种细菌的样品，采用划线分离和培养，使原来混杂在一

起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得

纯种。划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进

行划线，第一区（A区）面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和

第三区（B、C区）是逐级稀释的过渡区，第四区（D区）则是关键

区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型

单菌落，平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。

2.琼脂斜面接种法

主要用于菌落的移种，以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。用接

种环（针）挑取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部向上划一条直

线，然后再从底部沿直线向上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。

3.穿刺接种法

此法多用于半固体培养基或三糖铁、明胶等具有高层的培养基接

种，半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。接种时用接种

针挑取菌落，由培养基中央垂直刺至距管底0.4cm处，再沿穿刺线退

出接种针。三糖铁等有高层及斜面之分的培养基，穿刺搞层部分，退

出接种针后直接划线接种斜面部分。

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4.液体培养基接种法

用于各种液体培养基如肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等的接种。用

接种环挑取单个菌落，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研磨接

种物，使细菌均匀得散落在液体培养基中。此接种法应避免接种环与

液体过多接触。

5.倾注平板法

本法主要用于饮水、饮料、牛乳和尿液等样品中的细菌计数。取

纯培养物的稀释液或原样品lml至无菌培养皿内，再将已融化并冷却

至45-50℃左右的琼脂培养基15-20ml倾注入该无菌培养皿内，混匀，

待凝固后置37℃培养，长出菌落后进行菌落计数，以求出每毫升样

品中所含菌数。

6.涂布接种法

涂布法接种是一种常用的接种方法，不仅可以用于计算活菌数，

还可以利用其在平板表面生长形成菌苔的特点用于检测化学因素对

微生物的抑杀效应。将一定量的菌液或稀释液加到琼脂培养基表面，

然后用灭菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反复涂布，使被接种

液均匀分布于琼脂表面，然后贴上药敏纸片，或直接培养，本法经培

养后细菌形成菌苔。

高压灭菌锅灭菌效果的监测方法

高压锅的灭菌效果关系到最终试验结果的成败，因此，实验室要

定期对高压锅的灭菌效果进行监测，目前监测的方法主要有以下3种：

1、化学指示卡

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化学指示卡只能监测灭菌锅的灭菌温度，并不能准确监测灭菌时

间，通过颜色变化来达到监测效果。

优点是使用方便快捷，缺点是不能准确监测灭菌时间。

如果高压锅使用的频率较高，建议每次都在需要灭菌的的材料外

侧使用化学指示卡作为标识。

2、留点温度计

留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计

的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应在1℃之间，

则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。

如果高压锅使用的频率较高，建议每个月用留点温度计对高压锅

灭菌效果进行监测。

3、生物指示剂

生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的

性能，灭菌程序的验证，生产过程灭菌效果的监控等。

1）按结构分可分为片状生物指示剂和自含式生物指示剂。一般

来说都是用的自含式的多，就是里面有菌片，外面是密封的安瓿。

2）按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。

通用型生物指示剂根据芽孢复苏后指示菌种新陈代谢引起培养液pH

改变，通过酸碱指示剂变色来进行判读，时间一般在24或48小时以

上；而快速型生物指示剂根据芽孢复苏后的酶促反应，通过荧光进行

判读，时间一般为3-4小时，同时国外正在研发更加快速的生物指示

剂，有望在1小时之内得出结果。

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生物指示剂也是GB15981-199