生物制品中RNase残留检测－核酸荧光底物法.docxVIP

GB/TXXXXX—XXXX

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ICS65.020.20

CCSB38

团体标准

T/FDSAFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXX

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生物制品中RNase残留检测－核酸荧光底物法

DetectionofRNaseresiduesinbiologicalproducts-Nucleicacidfluorescencesubstratemethod

（征求意见稿）

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT中国食品药品企业质量安全促进会??发布

T/FDSAXXXX—202X

T/FDSAXXXX—202X

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目次TOC\o1-2\h\z\u

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5试剂和材料 1

6仪器和设备 2

7分析步骤 2

8结果分析 3

8.1定性分析 3

8.2定量分析 3

8.3定量限 3

8.4重复性 3

前言

本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国食品药品企业质量安全促进会提出并归口。

本文件起草单位：武汉瀚海新酶生物科技有限公司、国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量监测与评价重点实验室、中生复诺健生物科技（上海）有限公司、江苏申基生物科技有限公司、苏州艾博生物科技有限公司、北京引正基因科技有限公司、深圳市晋百慧生物有限公司、惠正奇医药（广州）有限公司、广州正达医药科技有限公司、百奥泰生物制药股份有限公司、深圳深信生物科技有限公司。

本文件主要起草人：杨广宇、耿玉杰、李梁、严壮、陆家海、叶宇翔、武飞飞、竺添、沈明云、顾文艺、于磊、黄贤明、梅雄、李文华。

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生物制品中RNase残留检测－核酸荧光底物法

范围

本标准规定了使用核酸荧光底物法测定生物制品中核糖核酸酶残留量检测的方法。

本标准适用于使用核酸荧光底物法测定生物制品中核糖核酸酶残留量检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成对本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

术语和定义

核糖核酸酶ribonuclease，RNase

水解核糖核酸（RNA）中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶

核糖核酸酶AribonucleaseA，RNaseA

水解单链或双链RNA，产生具有5’-磷酸末端的单核苷酸或寡核苷酸的核酸内切酶。

核糖核酸酶A活力单位activityunitofribonucleaseA

以酵母RNA为底物，在37°C和pH5.0条件下，1min内使反应液在260nm处的吸光度增加1.0所需的酶量。

注：一个酶活单位以U表示。

原理

试样与核酸荧光底物一起孵育，试样中残留的RNase催化核酸荧光底物分解，降解产物在对应波长的激发下会发出荧光，通过荧光检测器检测，外标法定量，测定RNase的含量。

试剂和材料

水

符合GB/T6882规定的二级水。

0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液(Tris-HCl)缓冲液，pH7.6

精密称取12.12gTris-base，缓慢加入HCl调pH至7.6（25℃），混匀后定容至1000mL。高温高压灭菌，根据每次测试量分装，于-20℃放置储存。

0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸溶液(Tris-EDTA)缓冲液，pH8.0

精密称取0.61gTris-base，0.19gEDTA-2Na·2H2O，溶于水中，缓慢加入NaOH或HCl调pH至8.0（25℃），混匀后定容至1000mL。高温高压灭菌，根据每次测试量分装，于-20℃放置储存。

核酸荧光底物

人工合成的RNA，带有荧光基团和淬灭基团，其中荧光基团的激发和发射波长为Ex/Em=535nm/575nm。干粉形式的核酸荧光底物于-20℃避光储存。

仪器和设备

实验室常规设