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ICS65.020.20
CCSB16
DB2305
双鸭山市地方标准
DB2305/T040—2024
水稻纹枯病菌分离及鉴定技术规程
2024-08-30发布2024-09-30实施
双鸭山市市场监督管理局发布
DB2305/T040—2024
前 言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由双鸭山市农业农村局提出并归口。
本文件起草单位：黑龙江省农业科学院佳木斯分院、宝清县小城子镇乡村振兴发展服务中心、芜湖
职业技术学院。
本文件主要起草人：杨晓贺、姚亮亮、于昌红、顾鑫、吴彦龙、高忠臣、丁俊杰、高雪冬、邱磊、
张茂明、王自杰、张家智、付久才、马瑞、刘伟、王庆胜、黄成亮。
I
DB2305/T040—2024
水稻纹枯病菌分离及鉴定技术规程
1范围
本文件规定了水稻纹枯病样本的采集与保存，病原菌的分离、纯化、鉴定及保存技术要求。
本文件适用于水稻纹枯病菌的分离和鉴定。
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
水稻纹枯病
由立枯丝核菌侵染引起的一种水稻真菌病害，主要危害叶鞘、叶片形成云纹状病斑。田间症状见附录
A。
3.2
单菌丝分离
利用真菌培养时不产生分生孢子而产生快速生长菌丝的特点，切取菌丝前端进行菌丝分离，以获得纯
化菌株。
4仪器和用具
4.1常用仪器
4.1.1超净工作台
洁净等级100级@≥0.5um。平均风速0.25m/s～0.6m/s。
4.1.2高压灭菌锅
稳定范围0℃～135℃。灭菌时间范围4min～120min，最高工作压力0.22MPa～0.25MPa。
4.1.3光照培养箱
稳定范围0℃～50℃。稳定波动±1℃。光照度0LX～7500LX。
1
DB2305/T040—2024
4.1.4光学显微镜
目镜10×，物镜10×、40×。
4.1.5电子天平
感量0.01g。
4.1.6常用工具
剪刀、培养皿、吸水纸、接种针、试管、酒精灯、记号笔、载玻片、盖玻片、镊子，医用纱布等。
5样本采集与保存
水稻成熟期从田间剪取发病茎秆（其特征见附录B），按品种及采集地装入牛皮纸袋，贴上标签，注
明采集时间、地点和水稻品种，带回实验室。放置于4℃冰箱内保存备用。
6分离技术
6.1培养基的配制
6.1.1水琼脂培养基
将20g琼脂粉加水煮沸后定容至1000mL，配制成2%水琼脂培养基。121℃湿热灭菌25min。
6.1.2马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
将去皮马铃薯200g切成小块，加水1000mL煮沸25min，用四层纱布过滤，过滤后加入琼脂20g，
再煮沸后加入葡萄糖20g，加水定容至1000mL，121℃湿热灭菌25min。
6.2病菌分离
将病组织用自来水冲洗干净，用吸水纸吸干表面水珠，将病组织剪成长宽各2mm×5mm的小块，
将其放置于水琼脂平板上，每个平板放置5块病组织，置于25℃光照培养箱内培养（见附录C）。培养
24h后，病组织周围
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