大肠杆菌和菌落总数.pdfVIP

所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方式是稀释平

板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-formingunit，cfu)数，故

其单位应是cfu/g(mL)。它反映的是检样中活菌的数量。

所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰

氏阴性无芽胞杆菌的总称，要紧由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆

菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。水中大肠菌群的查验方式，经

常使用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可运用于各类水样的查验，但操作繁琐，

需要时刻长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂

质较多、易于阻塞滤孔的水样。

(三)实验器材

(1)菌落总数的测定：

1)培育基：牛肉膏蛋白胨琼脂培育基

牛肉膏g蛋白胨NaCl水1000mL～

将培育基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏经

常使用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。也可放

在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如略微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，

然后当即掏出纸片。在上述烧杯中先假设少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，

加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的整体

积。在未调pH前，先用周密pH试纸测量培育基的原始pH，若是偏酸，用滴管向培

育基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达。

反之，用1mol/LHCL进行调剂。

无菌生理盐水：需用生理盐水浓度是%：称取克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，

稀释到100毫升。

2)器材试剂：牛肉膏蛋白胨NaCl1moL/LNaOH1moL/LHCL灭菌水

高压蒸气灭菌锅培育皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙

pH试纸（）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸量筒玻

璃棒电热炉称量杯灭菌三角瓶灭菌的具塞三角瓶灭菌平皿灭菌吸管

灭菌试管

高压蒸气灭菌：1.将内层锅去向，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架

相平为宜。

2.放回内层锅，并加入要灭菌的培育皿、试管、烧杯等物品（注

意不要装得太挤，以避免防碍蒸气流通而阻碍灭菌成效）。

3.加盖，并将盖上的排气管插入内层的排气槽内，再2两两对称

的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

4.本实验用，121.5℃，20min灭菌。灭菌所需时刻到后，切断电

源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，

打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，掏出灭菌物品。

(2)大肠菌群的测定；

1)培育基：

①乳糖胆盐蛋白胨培育基：

蛋白胨20g，猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g，乳糖10g，

%溴甲酚紫水溶液25mL，水1000mL，。

制法：将蛋白胨、胆盐从乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装，每

瓶50mL或每管5mL，并倒置放入一个杜氏小管，l15℃灭菌15min。

双倍或三倍乳糖胆盐蛋白胨培育基：除水之外，其余成份加倍或取三倍用量。

②伊红美蓝琼脂培育基：

蛋白胨10g，乳糖10g，KHP02g，2％伊红水溶液20Ml，％美蓝水溶液

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lOmL，琼脂17g，水1000mL，。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min

备用。临历时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，

倾注平板。

③乳糖发酵管：

除不加胆盐外．其余同乳糖胆