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经口急性毒性试验

※(一)目的

化学毒物经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。奉实

习的目的是学习急性毒性试验的实验设计原则，学会经口灌胃技术、

随机分组方法，掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分级标准。

※(二)原理

选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的

设计原则将动物分成数个染毒组。一次或24h内多次给予受试物后，了

解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可

能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂

量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。

※(三)内容

1．健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。

2．称重、编号和随机分组方法。

3．受试化学物溶液的配制。

4．小鼠和大鼠经口灌胃操作技术．

5．毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级

※(四)材料和试剂

1.实验动物健康成年小鼠或大鼠若干只。

2.器材灌胃针(大鼠、小鼠适用)、注射器(0.25，1.2，5m1)、吸管(0.

1，0.2，0.5，1，2，10ml)、容量瓶(10，25，50ml)、烧杯(10，25，

50ml)、滴管、电子天平(感应量1／10000g)、动物体重秤、外科剪刀、

镊子。

3.试剂受试物(由指导教师自定)，苦味醒酒精饱和液，o．5％品红溶

液或其他染色剂．

※(五)操作步骤

1．健康动物的选择。

2．性别辨认。

3.动物称重、编号和分组；

(1)称重；称量大、小鼠体重的秤，其感应量需在0.1g以下，并经过校

正。称量时注意轻抓轻放动物，避免激惹，等动物安静后记录体重读

数，以g表示。

(2)编号：以染色法编号。用苦味醒酒精饱和液为染料。以黄色为个位

数号码，红色为十位数号码。一股以头部为1号，按顺时针依次右前肢

为2号，右腰为2号，右后肢为4号，尾根部为5号，右后肢为s号，左腰

为7号，左前肢为8号，后背为9号，10号为在头部染红色标记，11号在

右前肢染红色和黄色标记各一，依次类推。

(3)随机分组。

4．剂量设置由指导教师根据受试物类别，选择LD50计算方法设计剂

量组。

5．受试物的配制

(1)量取受试物：固体化学物采用称量法，液体化学物可用称量法或吸

量法

1)称量法：将受试物放入已知重量的容器内称重。加溶剂溶解或稀释，

倾入刻度容器（如容量瓶)内，混匀，再加溶剂至刻度。算出浓度(rog

／mi)备用。

2)吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶

中，用溶剂加至

刻度。计算公式为：

X＝A*V/d*1000

式中；x：应吸取受试物的容积(mD；

A：设计要求的受试物浓度(mg／ml：

V：容量瓶容积(m1)；

d；受试化学物比重。

(2)受试物的稀释

1)等浓度稀释法：将受试化学物配成一种浓度，此时各剂量组的实验

动物将给予不同体积的受试物。例如受试物配成1000mg／lOml的溶液，

五个剂量组的剂量分别为100、200、400、800、1600mg／kg，则各剂

量组动物将依次给予1.0mi／kg、2．Omi／kg直至最高剂量组的16mi／

kg。

2)等容量稀释法：按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度

的受试物溶液，各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化

学物。如上例的情况，将受试物别配成l00mg／10ml、200mg／l0ml、4

00mg／10ml、800mg／10ml、1600mg／10ml5个浓度，溶液，各剂量组

动物给予受试物的体积均为l0ml／kg。

6、灌胃操作小鼠、大鼠及豚鼠灌冒法：采用专用小鼠和大鼠灌胃针，

也可自制。将头的16号注射针(适用于小鼠)或20~24号腰穿针(适用于

大鼠、豚鼠)(注意事先可用锡在针尖周围焊一圆头，使其不易损伤动

物的消化遭)安装在适当容积的注射器上，吸所需的受试物溶液，左手

抓住动物双耳后至背部的皮肤(小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，无名指、

小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧)，将动物固定成垂直体位，腹部面

向操作。注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持注射器，将针

头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，

可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。如遇动物

挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚

至误入气管，导致动物立即死亡。

一般进针深度小鼠2.5～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm。为了验明是否已正

确地插入胃部，可轻轻回抽注射器，