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课题目的阐明植物组织培养基本原理。学习植物组织培养基本技术,进行菊花或其它植物组织培养。课题重点与难点课题重点:植物组织培养过程中使用无菌技术。课题难点:植物组织培养过程中使用无菌技术。第2页第2页

快速繁殖。生产药物、食品添加剂、香料、色素、和杀虫剂等。比如:紫杉醇,生物碱、紫草素等。转基因植物哺育。培养无病毒植株。一、植物组织培养意义:第3页第3页

二、细胞分化与全能性细胞分化:个体发育中,细胞在形态、结构和生理功效上出现稳定性差别过程。细胞全能性:含有某种生物全套遗传信息任何一个活细胞,都含有发育成完整个体能力,即每个生物细胞都含有全能性。第4页第4页

1.植物学家将胡萝卜韧皮部细胞分离出来,将单个细胞放在特定培养基中培养,取得了许多完整植株,这些植株特点是()A.彼此性状极为相同 B.都是单倍体植株C.植株变异频率较高 D.都是纯合体植株2.依据分裂潜能,干细胞可分为全能干细胞(可发育成完整个体)、多能干细胞(可发育成各种组织和器官)和专能干细胞(发育成专门组织和器官),则这些细胞在个体发育中分化顺序是()A.全能——专能——多能B.全能——多能——专能C.多能——全能——专能D.专能——全能——多能练习:第5页第5页

三、植物组织培养基本过程第6页第6页

什么叫脱(去)分化、再分化?愈伤组织细胞有什么特点?如何控制细胞脱分化与去分化?思考题:第7页第7页

四、影响植物组织培养原因:1、外植体选取不同植物组织培养难度不同同一个植物不同组织培养难度不同2、培养基配制(MS培养基)大量元素:C.H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物:甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素:生长素、细胞分裂素、赤霉素等第8页第8页

3.不同植物激素使用次序和使用量使用顺序试验结果先生长素,后细胞分裂素有助于分裂但不分化先细胞分裂素,后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提升生长素细胞分裂素比值结果比值高时促根分化,抑芽形成比值低时促芽分化,抑根形成比值适中增进愈伤组织生长第9页第9页

3.不同植物激素使用次序和使用量生长素细胞分裂素比值结果比值高时促根分化,抑芽形成比值低时促芽分化,抑根形成比值适中增进愈伤组织生长第10页第10页

4、消毒在培养整个过程中,都需要是一个无菌环境原因:5.pH、温度、光照菊花:pH=5.8温度控制在18—22℃每日光照12h第11页第11页

制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、试验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上第12页第12页

此时组织或细胞为离体,即细胞所生活环境为液体有机物营养环境,而不是能表达其整个植物体光能自养在培养过程中,是脱分化、再分化过程,伴随芽和根形成,就含有了自养能力,是由细胞到一个个体演变过程1.高等植物是光能自养型生物,为何在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基?2.培养过程中为何需要进行光照思考?第13页第13页

1、培养基灭菌(高压蒸汽灭菌)2、外植体消毒(酒精、氯化汞)3、接种无菌操作(酒精、酒精灯——灼烧)4、无菌箱中培养;5.移栽到消过毒环境中生存一段时间。3.在整个操作过程中,是如何来实现无菌环境?第14页第14页

结果分析与评价(一)对接种操作中污染情况分析(二)是否完毕了对植物组织脱分化和再分化(三)是否进行了统计、对照与统计(四)生根苗移栽是否合格第15页第15页

课题延伸(略)练习1.答:植物组织培养所利用植物材料体积小、抗性差,对培养条件要求较高。用于植物组织培养培养基同样适合于一些微生物生长,如一些细菌、真菌等生长。而培养物一旦受到微生物污染,就会造成试验前功尽弃,因此要进行严格无菌操作。2.答:外植体生理状态是成功进行组织培养主要条件之一。生长旺盛嫩枝生理情况好,容易诱导脱分化和再分化。第16页第16页

办法:酶解法在温和条件下,用纤维素酶、果胶酶分解物理法:离心、振动、电刺激等化学法:用聚乙二醇(PEG)等试剂作为诱导剂包括膜融合和核融合形成各种杂种细胞AA、AB.BB等植物组织培养过程第17页第17页

右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答:

(1)环节①是,最惯用办法是。

(2)环节③普通惯用化学试剂是,目的是。(3)在利用杂种细胞哺育成为杂种植株

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