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单克隆抗体的制备流程--第1页
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单克隆抗体的制备流程
(一)动物的选择与免疫
1.动物的选择纯种BALB/C小鼠,较温顺,离窝的活动范围小,体弱,食量及排
污较小,一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种
BALA/C小鼠。
2.免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb
至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原
的特性不同而定。
(1)可溶性抗原免疫原性较弱,一般要加佐剂,半抗原应先制备免疫原,再加佐
剂。常用佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫抗原1~50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射(一般0.8~
1ml,0.2ml/点)
↓3周后
第二次免疫剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip(腹腔内注射)(ip剂量不
宜超过0.5ml)
↓3周后
第三次免疫剂量同一,不加佐剂,ip(5~7天后采血测其效价)
↓2~3周
加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv(静脉内注射)
精品资料
单克隆抗体的制备流程--第1页
单克隆抗体的制备流程--第2页
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↓3天后
取脾融合
目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如:①
将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗
原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞
因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,增强免疫细胞对抗原的反应性。
(2)颗粒抗原免疫性强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例,
免疫时要求抗原量为1~2×10个细胞。
7
初次免疫1×10/0.5mlip
7
↓2~3周后
第二次免疫1×10/0.5mlip
7
↓3周后
加强免疫(融合前三天)1×10/0.5mlip或iv
7
↓
取脾融合
(二)细胞融合
1.细胞融合前准备
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