单克隆抗体的制备流程.pdfVIP

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单克隆抗体的制备流程--第1页

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单克隆抗体的制备流程

(一)动物的选择与免疫

1.动物的选择纯种BALB/C小鼠,较温顺,离窝的活动范围小,体弱,食量及排

污较小,一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种

BALA/C小鼠。

2.免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb

至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原

的特性不同而定。

(1)可溶性抗原免疫原性较弱,一般要加佐剂,半抗原应先制备免疫原,再加佐

剂。常用佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。

初次免疫抗原1~50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射(一般0.8~

1ml,0.2ml/点)

↓3周后

第二次免疫剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip(腹腔内注射)(ip剂量不

宜超过0.5ml)

↓3周后

第三次免疫剂量同一,不加佐剂,ip(5~7天后采血测其效价)

↓2~3周

加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv(静脉内注射)

精品资料

单克隆抗体的制备流程--第1页

单克隆抗体的制备流程--第2页

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↓3天后

取脾融合

目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如:①

将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗

原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞

因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,增强免疫细胞对抗原的反应性。

(2)颗粒抗原免疫性强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例,

免疫时要求抗原量为1~2×10个细胞。

7

初次免疫1×10/0.5mlip

7

↓2~3周后

第二次免疫1×10/0.5mlip

7

↓3周后

加强免疫(融合前三天)1×10/0.5mlip或iv

7

取脾融合

(二)细胞融合

1.细胞融合前准备

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