酶免检测技术原理及影响.ppt

抗原抗体反应原理氢键结合力范德华引力静电引力疏水作用力抗原抗体结合力第10页,共39页，星期六，2024年，5月抗原抗体反应特点及影响因素抗原抗体反应特点：1、特异性2、比例性3、可逆性抗原抗体反应影响因素：1、反应物自身因素：抗原抗体2、反应环境条件：电解质酸碱度温度抗原抗体反应影响因素：1、反应物自身因素：抗原理化性状、表位种类、数目抗体来源、特异性、亲和性、效价2、反应环境条件：电解质8·5g/LNaCl溶液酸碱度pH6--9为宜温度最适温度为37℃第11页,共39页，星期六，2024年，5月二、酶免疫技术的分类、特点及原理第12页,共39页，星期六，2024年，5月1、酶免技术的分类.酶免疫技术酶免疫组化组织切片或其它标本中抗原的定位酶免疫测定液体标本中抗原或抗体的定性和定量均相异相固相酶免疫测定液相酶免疫测定1、酶放大免疫测定技术EMIT2、克隆酶供体免疫分析CEDIA分离结合、游离酶标记物，底物测定检测微量短肽激素、小分子抗原最广泛，酶联免疫吸附试验小分子激素、半抗原测定第13页,共39页，星期六，2024年，5月 酶免技术的分类2、酶免技术特点抗原抗体反应的特异性+酶高效催化反应的专一性主要试剂:酶标记的抗体或抗原酶标物特点：免疫学活性酶对底物的催化活性第14页,共39页，星期六，2024年，5月3、酶免技术原理及特点原理：酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析特点：灵敏度高、特异性强、准确性好酶标记试剂能够较长时间保持稳定操作简便、对环境没有污染。易与其它技术偶联衍生出适用范围更广的新方法。第15页,共39页，星期六，2024年，5月二、酶联免疫吸附试验第16页,共39页，星期六，2024年，5月1、基本原理.原理包被12反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体3洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离4底物显色定性或定量的分析三个必要试剂固相的抗原或抗体酶标记物（酶结合物）酶反应的底物第17页,共39页，星期六，2024年，5月.双抗体夹心法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定HBsAg、HBeAg、甲胎蛋白、HCG等.2、方法类型及反应原理第18页,共39页，星期六，2024年，5月方法类型及反应原理双位点一步法（测抗原）方法：用单克隆抗体做成固相抗体和酶标抗体，待测抗原酶标抗原同时加入，加底物显色应用：与双抗体夹心法相似，提高了特异性、灵敏度，需注意“钩状效应”第19页,共39页，星期六，2024年，5月竞争法（测抗原）

方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。

应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）方法类型及反应原理第20页,共39页，星期六，2024年，5月.双抗原夹心法（测抗体）原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似应用：乙型肝炎表面抗体方法类型及反应原理第21页,共39页，星期六，2024年，5月方法类型及反应原理间接法（测抗体）方法用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。优点一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体应用常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定第22页,共39页，星期六，2024年，5月方法类型及反应原理竞争法（测抗体）原理：类似检测抗原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测第23页,共39页，星期六，2024年，5月方法类型及反应原理捕获法（测抗体）应用：病原体急性感染诊断中的IgM型抗体甲型肝炎HAV-IgM抗体乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体第24页,共39页，星期六，2024年，5月四、ELISA法检测注意事项第25页,共39页，星