TCVMA-犬巴贝斯虫实时荧光 PCR 检测方法.pdf

ICS

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团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

犬巴贝斯虫实时荧光PCR检测方法

Real-timePCRassayfordetectionofBabesiacanis.

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征求意见稿

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件不涉及专利。

本文件由新瑞鹏宠物医疗集团有限公司提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

I

犬巴贝斯虫实时荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了犬巴贝斯虫实时荧光PCR检测方法的试剂、仪器和耗材、操作步骤、结果判定、实验

室生物安全等技术要求。

本文件适用于血液中犬巴贝斯虫核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试剂

4.1DNA提取试剂

DNA提取试剂采用现成的病毒核酸提取试剂条，或选取商品化的病毒DNA提取试剂盒并参照说明书进

行DNA提取。

4.2已灭菌1×PBS缓冲液

4.3引物探针

4.3.1采用针对巴贝斯虫（犬巴贝斯、吉式巴贝斯）的引物及探针：

上游引物BG-F：5-TGTACCCAACCACGACAGA-3

下游引物BG-R：5-TCTTTCCCCAATGTCAGAG-3

荧光探针BG-P：5-GTGAGTGACGTGCACTGGC-3

上游引物BC-F：5-GTTCGAGTTTGCATTCGTT-3

下游引物BC-R：5-ATGCCCCCAACCGTTCTATTA-3

荧光探针BC-P：5-AGTTCGCTTTTGGGTTTCCCTTTTTAC-3

4.3.2使用国家农业行政主管部门批准的其他引物、探针，应对检测程序和判定标准作相应调整。

4.4阴性及阳性对照

阴性及阳性对照的制备方法见附录A。

4.5其他试剂

•次氯酸消毒液、2XTaqManFastqPCR预混液、无菌无核酸酶水、1xPBS。

5仪器和耗材

1

分析天平（感量0.1mg）、高速台式冷冻离心机（最高离心速度不低于12000r/min）、冰盒、实时

荧光PCR仪及配套反应管（板）、-20℃冰箱、可调移液器（2µL，20µL，200µL，1000µL）、1.5mL

离心管（无核酸酶）、自动化核酸提取机。

6操作步骤

6.1样品采集及运输

样品采集及运输按照NY/T541的规定执行，采集猫血液用于检测，样品应在冷藏条件下尽快运输至

实验室，避免反复冻融。采样时应穿戴个人生物安全防护装备，实施现场消毒和废弃物处理。

6.2样品处理

检测前样品应在二级