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Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)--第1页

Trizolxx

一、分离纯化的基本原理

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量

的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和NorthernBlot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制

细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料

无水乙醇、氯仿、Glycoge（可能需要）、1.5mlEppendof管（RNase-free

Tips（RNase-free）

三、准备工作

RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以

暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的咼温咼压蒸气火菌方法和蛋白抑

制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有

关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一

般情况下采用用DEPC焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂）配制的70%乙醇擦洗取

液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理

尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free的塑料制品，如没

有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使

用。处理步骤如下：

1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注

意:DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使

塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

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3在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑

料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品

烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA

1液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织

变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol,

转入离心管进行第2步操作。

，，

（液氮既能使各种组织成分不易被破坏或降解又能使组织变硬脆性增加易

于磨碎。终止细胞内外一切生物反应，防止RNA酶的降解反应）

2）匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol加入Trizol。另外，组织体积不能

超过Trizol体积的10%,否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2

分钟。

五、从细胞中提取总RNA

1）培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体