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二代测序及其应用
最近几年里，新一代DNA测序技术平台在那些大型测序实验室
中迅猛发展，各种新技术如雨后春笋般涌现，而其中令人眼前一亮的
便是二代测序！
那么，究竟何为二代测序呢？让我们先来看看传统测序吧。
Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定
的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、
C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE
胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。Sanger测序法
一直以来因可靠、准确，可以产生长的读长而被广泛应用，但是它的
致命缺陷是相当慢。所以，这并不是人们想要的理想速度，而后，新
一代的测序技术应运而生，它们利用大量并行处理的能力读取多个短
DNA片段，然后拼接成一幅完整的图画。
接下来，便来揭开二代测序的神秘面纱。
第二代测序技术的核心思想是边合成边测序（Sequencingby
Synthesis)，即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列，现
有的技术平台主要包括Roche/454FLX、Illumina/SolexaGenome
Analyzer和AppliedBiosystemsSOLIDsystem。这三个技术平台各有优
点，454FLX的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp；
Solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成
本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10；SOLID
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99.94%，而在15X覆
盖率时的准确度可以达到99.999%，是目前第二代测序技术中准确度
最高的。
二代测序作为新一代测序技术的出现，必将使得生物学研究新领
域不断被挖掘探索，而此项技术也将会被不断运用发展，在越来越多
的领域中发挥巨大的力量。
目前，二代测序主要有以下应用：
1.基因组从头测序及重测序，从头测序主要应用于基因组序列未
知的物种，重测序是指该物种基因组序列已被测序，有参考基因组序
列的测序工作。在二代测序技术的推动下，大量生物的全基因组被顺
利测序，大量物种的基因组计划完成。
2.RNA测序，灵敏度高，数字信号，无需事先知道基因组信息
3.smallRNA测序
4.染色体免疫共沉淀测序，研究体内DNA与蛋白质的相互作用
5.DNA甲基化，基因启动子甲基化检测在临床诊断、药物敏感
性检测等方面具有很高的应用价值
既然已经知道二代测序在技术方面的应用，接下来再看看二代测
序在具体领域的应用。
二代测序在临床的应用前景：“二代测序”技术带领基因组学研
究进入了一个全新的领域，也给临床复杂疾病的基因诊断和治疗带来
了新的曙光。对于多基因致病的复杂疾病或致病基因结构庞大复杂的
疾病(如肥厚型心肌病、扩张型心肌病等)，传统的一代测序往往束手
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