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TRIzol法提RNA、DNA和蛋白质

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方

法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离

一个样品的一个样品的蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时

因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，

RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用

异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组

织、107细胞）。对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提

取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于NorthernBlot，

dotblot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条

引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳

性。共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋白

质可用于WesternBlotting。

规格：100ml黄色透明液体

储存条件：2-8℃避光保存12个月

注意：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。忌

用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

预防RNase污染注意事项：

1．经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。

2．使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交*污染。

3．RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase

的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5MNaOH中浸泡10

分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。

4．配制溶液应使用无RNase的水（将水加入处理过不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC

至终浓度0.01℅v/v,放置过夜,高压灭菌。注：DEPC有致癌之嫌，需小心操作。）

RNA的提取

准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过

的水配制)

操作步骤:

1.匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1mlTRIzol,用匀浆仪进行匀

浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培

养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。

TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入

1mlTRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细

胞需用匀浆仪处理。

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）

可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分

子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液

进行下一步操作。

5.每使用1mlTRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6.2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一

个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7.把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙

醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8.2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉

淀。移去上清。

9.用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1mlTRIzol