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布氏杆菌病的检测

牛布氏杆菌病的检测

传统的检测方法

细菌学检测

布氏杆菌需在实验室里进行。初步分离时,须在二氧化碳环境中方

能生长,而且标本中必须存在大量活菌才能分离到该菌,培养细菌的周

期长,需要花费大量的时间才能得出结果。因此在布病的检测中已经逐

渐被淘汰。

血清学检测

该法同样要在实验室才能操作,虽然凝集试验()操作简便,且所需

时间短,但由于在为中性或弱酸性时凝集最活跃,所以凝集试验会因为

抗体交叉反应而易出现假阳性反应。判断结果有很大的误差,在年被取

消了其作为布氏杆菌病的检测方法[]。沉淀试验()是可溶性抗原与相应

抗体结合,在适量电解质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀,由于是人为

的观察结果,因此存在很大的主观性,有时会因出现交叉反应而

误判结果,且有很大的局限性,不是一种理想的检测布病的方法。

补体结合试验()主要用于检测牛、绵羊、山羊和猪的布氏杆菌病,在操

作过程中对温度和滴加试剂的量有很高的要求,需要很多控制条件,结果

也无法避免假阳性的影响。放射免疫试验是年[]建立起来的,由于在该

实验中要用大量的放射性元素会对人体和环境造成很大的威胁,因此该

法一直没有得到广泛运用。

变态反应检测

临床上可用布氏杆菌水解素注射于动物根皱褶处,及各观察一次,

若注射部位发红肿胀即判为阳性反应。此法对慢性病例检出率较高,并

且注射水解素后无抗体产生,不妨碍以后的血清学检查。此法主要用于

山羊和绵羊检疫,但山羊的变态反应试验不如绵羊变态反应试验那样易

读取结果,对中、后期病山羊的诊断意义较大,适用于山羊布氏杆菌病

的筛检,不作个体山羊的诊断依据。

酶联免疫吸附试验

是免疫技术中应用最广的一种,在适合的载体上,酶标记抗体或抗

原与相应的抗原或抗体形成酶标记的抗原抗体免疫复合物,在一定的底

物参与下,复合物上的酶催化底物,使其水解、氧化或还原成另外一种

带色物质。由于在一定条件下,酶的降解底物和呈现色泽是成正比的,

因此,可以应用酶测定仪进行测定,从而计算出参与反应的抗原和抗体

的种类和含量。自从年等和等分别报道酶联免疫吸附试验(

,)以来,得到了很大的发展,到目前其类型也很多,在此对常用的两

种介绍如下。

间接酶联免疫吸附试验

年第一次建立间接(,)法检测人布氏杆菌病,之后在多种动物上用

该法检测布氏杆菌病。年等用间接从羊奶中检测布氏杆菌病,其特异性

和敏感性都特别高;年等人用抗的单克隆酶轭合物间接诊断牛布氏杆菌

病,检测了三组血清,第一组是没有注射疫苗的阴性血清,第二组是注射

了疫苗的阴性血清,第三组是来自阳性牛的血清。间接检测的特异性前

两组分别是和,间接检测阳性血清的敏感性是;得出的敏感性和特异性

都很高;年.等评价了间接在阿根廷奶牛中用奶和血清检测诊断布氏杆

菌病的效果,在来自相同奶牛的奶和血清中间接检测的特异性和敏感性

分别为:奶样敏感性为特异性为;血清的敏感性为特异性。奶和血清的

敏感性相同而奶的特异性比血清的高[]。说明可以在检测奶牛布氏杆菌

病的时候可以用奶代替血样,排除了采血带来的麻烦,大大地提高了检

测效率。赵云玲等人分别通过琥红凝集试验()、试管凝集试验()、和

酶联吸附()试验检测某牛厂送检份血清和份乳清,所得的实验结果说明

乳清完全可以代替血清用于牛布氏杆菌病的血清学检测;年.[]等人比较

了在大量奶样中用间接和用乳汁环状试验检

测流产性布氏杆菌抗体的差异,最后得出间接的敏感性()高于乳汁

环状试验(),而间接的

特异性()低于乳汁环状试验(),间接的敏感性比乳汁环状试验的高

出很多,特异性和乳汁环状试验的差不多。年[]等人评价了用单克隆抗

体和蛋白作为过氧化轭合物的三种血清间接诊断牛布氏杆菌病的效果,

得出间接的敏感性和特异性都非常的高。年刘耀兴等人对牛布氏杆菌

病间接与血清试管凝集试验()、琥红平板凝集试验()、缓冲平板凝集

试验()进行了临床运用比较。结果表明间接和其他三种检测方法阳性

和阴性符合率为,但间接法较、、方法先进、快速、结果客观可靠。根

据使用的不同抗原、抗球蛋白酶结合物和底物或色原体产生了多种间

接。有几种商用间接在广泛的田间试验中得到验证并推广使用。虽然

间接是高度敏感的方法,但是它不能把疫苗免疫产生的抗体与致病株感

染引起的抗体区别开来。因此,更多地把间接作为普查检测方法而不是

作为免疫家畜的检