(整理)大肠杆菌及菌落总数..pdf

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所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平

板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-formingunit，cfu)数，故

其单位应是cfu/g(mL)。它反映的是检样中活菌的数量。

所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰

氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆

菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。水中大肠菌群的检验方法，常

用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需

要时间长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质

较多、易于阻塞滤孔的水样。

(三)实验器材

(1)菌落总数的测定：

1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基

牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mLpH7.4～7.6

将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常

用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。也可放在称

量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然

后立即取出纸片。在上述烧杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，

加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体

积。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培

养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达

7.6。反之，用1mol/LHCL进行调节。

无菌生理盐水：需用生理盐水浓度是0.9%：称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸

馏水中，稀释到100毫升。

2)器材试剂：牛肉膏蛋白胨NaCl1moL/LNaOH1moL/LHCL灭菌水

高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙

pH试纸（pH5.5-9.0）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸

量筒玻璃棒电热炉称量杯灭菌三角瓶灭菌的具塞三角瓶灭菌平皿

灭菌吸管灭菌试管

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高压蒸气灭菌：1.将内层锅去处，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架

相平为宜。

2.放回内层锅，并加入要灭菌的培养皿、试管、烧杯等物品（注

意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果）。

3.加盖，并将盖上的排气管插入内层的排气槽内，再2两两对称

的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。

4.本实验用0.1MPa，121.5℃，20min灭菌。灭菌所需时间到后，

切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至

“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

(2)大肠菌群的测定；

1)培养基：

①乳糖胆盐蛋白胨培养基：

蛋白胨20g，猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g，乳糖10g，

0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，水1000mL，pH7.4。

制法：将蛋白胨、胆盐从乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装，每

瓶50mL或每管5mL，并倒置放入一个杜氏小管，l15℃灭菌15min。

双倍或三倍乳糖胆盐蛋白胨培养基：除水以外，其余成分加倍或取三倍用量。

②伊红美蓝琼脂培养基：

蛋白胨10g，乳糖10g，KHP02g，2％伊红水溶液20Ml，0.65％美蓝水

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溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．12