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实验十二常用血细胞化学染色

Cytochemistrystainforbloodcells

一、过氧化物酶染色

染色原理

粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase,

POX或MPO),能将底物H0分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基

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联苯胶成联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后

者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞

质内酶所在的部位。

试剂器材

1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1gTMB溶于100mL88%

乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。

2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不

再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。

3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。

4．稀过氧化氢溶液1%H01滴，加10mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。

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5．瑞氏(Wright)染色液。

6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。

操作步骤

1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液

呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。

2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和

溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H0溶液0.7mL，吹匀，染色6min。

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3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20min。

4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。

注意事顶

1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。

2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，

否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。

3．H0需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见

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阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H0过浓。若H0加于血片上不

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产生气泡，则示无效。

4．染色液pH应为5.5。

5．试剂应置于低温暗处，防止因光线照射而失效。

实验评价

1．POX染色是鉴别急性白血病类型最重要最常用的细胞化学染色方法，临

床上不管是哪种急性白血病，首先做POX染色，以区分是急性髓细胞白血

病还是急性淋巴细胞白血病。如变异型的急性早幼粒细胞白血病极易误诊为

急单、急粒中如以小型原粒细胞为主者极易误认为急淋等。在判读细胞POX

染色结果前，要先观察成熟粒细胞是否呈强阳性，以判断染色是否成功。

2．POX阳性说明是急性髓细胞白血病(阳性较强常见于急性粒细胞白血病，

弱阳性常见于急性单核细胞白血病)；阴性说明各种急性白血病的可能性均

有。因原始细胞多表现为阴性反应，故本法对白血病的分型有一定的局限性，

特别是对某些分化极差的白血病，可能失去鉴别意义。

3．四甲基联苯胺法操作简单，染色效果较好，试剂无致癌作用，但对染液

pH要求较高，如pH5.0会导致假阳性结果。

二、氯乙酸AS-D荼盼醋酶染色

染色原理

血细胞内的氯乙酸AS-D荼酚酯酶(naphytholAS-Dchloroacetateesterase,

NAS-DCE)水解基质液中的氯乙酸AS-D荼酚，产生AS-D荼酚，进而与基

质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部

位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。

试剂器材

1．10%甲醛甲醇固定液

甲醛25mL

甲醇75mL

混合后置4℃冰箱保存。

2．Veronal醋酸缓冲液

甲液：

醋酸钠(含3HO)1.94g

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巴比妥钠