vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株的研究的开题报告.pdfVIP

vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株的

研究的开题报告

一、研究背景及意义：

马耳他型布氏杆菌感染是一种人畜共患性传染病，病原体为马耳他

型布氏杆菌（Brucellamelitensis），可引起人和动物的严重疾病，对畜

牧业和人类健康造成严重威胁。根据WHO的统计，每年全球有超过50

万人感染马耳他型布氏杆菌，并且该病病死率在人群中达到2-5%。因此

开发有效的疫苗是预防和治疗马耳他型布氏杆菌感染的重要措施。

目前，已有一些马耳他型布氏杆菌疫苗投入使用，常用的包括S19

和RB51菌株疫苗。然而，由于这些疫苗存在副作用或无法很好的控制感

染，需要进一步研究开发更加安全、有效的马耳他型布氏杆菌疫苗。其

中，去除Brucellamelitensis的vriB12基因可能对疫苗的开发和制备具有

重要意义。vriB12基因是一种内源性小RNA，已被证明对马耳他型布氏

杆菌的毒力、生长和钝化起了重要作用，因此从菌株中去除该基因具有

极大的潜在利益。

二、研究目的：

本研究旨在运用分子生物学和遗传学技术建立vriB12基因缺失马耳

他型布氏杆菌M5-90疫苗株的制备方法，试图评估该疫苗株的安全性、

免疫原性和保护能力。

三、研究内容及方法：

3.1构建vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株

本实验将利用CRISPR-Cas9技术，针对Brucellamelitensis的

vriB12基因进行敲除，制备vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫

苗株。具体方法如下：

-制备Cas9蛋白和sgRNA

-分别构建Cas9和vriB12-gRNA载体Plasmid并转染到M5-90菌株

中，进行筛选鉴定

-利用PCR和WesternBlot验证目标基因敲除的效果

3.2评价vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株的安全性

和免疫原性

本实验将评价vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株的安

全性和免疫原性，具体方法如下：

-利用小鼠实验评估该疫苗株的毒性、致病性和安全性

-通过生物学、免疫学检测方法检测该疫苗株的免疫原性，以及对抗

Brucellamelitensis感染的免疫保护能力

四、研究预期结果：

本研究预期可以制备得到高效、安全、具有免疫原性和保护能力的

vriB12基因缺失马耳他型布氏杆菌M5-90疫苗株。该疫苗株不仅可以为

预防和治疗马耳他型布氏杆菌感染提供新的解决方案，而且对马耳他型

布氏杆菌的毒力和生长机制的研究也将有所推进。