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酵母菌药敏标准操作规程--第1页
酵母菌MIC检测标准操作规程（微量液基稀释法）
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酵母菌药敏标准操作规程--第1页
酵母菌药敏标准操作规程--第2页
1.培养基配置：
RPMI1640培养液：RPMI1640（GibcoBRL，Invitrogen）10g，NaHCO32.0g，吗啉
基丙磺酸（morpholinepropanesulfonicacid,MOPS,Sigma）34.5g（0.165M），加三
蒸水900ml溶解，1MNaOH调pH至7.0（25℃），定容至1000ml，过滤除菌，4℃
保存。
沙堡葡萄糖琼脂培养基（sabourauddextroseagar,SDA）：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼
脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，
定容至1000ml，115℃，高压灭菌，4℃保存。
2.抗真菌化合物的配制：
（1）待筛选化合物统一用DMSO溶解，配成6.4mg/ml母液，-70℃保存；
（2）药敏板制备前将50μl母液加入到450μlRPMI1640培养液中，充分振荡混匀，
稀释为640μg/ml中间浓度备用。
3.药敏板制备：
（1）取无菌96孔板，于每排1号孔加RPMI1640培养液200μl作空白对照；
（2）96孔板每排3～12号孔各加RPMI1640培养液100μl；
（3）2号孔分别加RPMI1640培养液180μl和640μg/ml抗真菌化合物溶液20μl，
充分混匀；每排为1个待筛选化合物；最后一排为质控氟康唑；
（4）2～11号孔10级倍比稀释，使各孔的最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、
2、1、0.5、0.25和0.125μg/ml，各孔中DMSO含量均低于1％；12号孔不
含药物，作阳性对照；
（5）药敏板配好之后如不立即接种真菌则必须用保险塑料袋封好，储存于-70℃。
4.阳性对照药浓度配置：
（1）氟康唑和氟胞嘧啶为水溶性药物，其母液用无菌蒸馏水配置；两性霉素、咪康
唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑、特比萘芬等为脂溶性药物，其母液用DMSO
溶解；
（2）氟康唑、氟胞嘧啶母液配置浓度为1280μg/ml，两性霉素、酮康唑、咪康唑、特
比萘芬、伊曲康唑母液配置浓度为1600μg/ml；
（3）所有抗真菌药物母液-70℃保存；
（4）氟康唑、氟胞嘧啶药敏板稀释浓度为：64-0.125μg/ml；
（5）两性霉素、酮康唑、咪康唑、特比萘芬、伊曲康唑药敏板稀释浓度为：
16-0.313μg/ml；
酵母菌药敏标准操作规程--第2页
酵
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