病理学特殊染色-----细菌、霉菌和病毒.pdf

细菌、霉菌和病毒

细菌

Gram碱性复红结晶紫法

试剂配制：

(1)苯胺油石炭酸复红液：

碱性品红0.5g，苯胺油1ml，石炭酸1g，30%酒精70ml。碱性品红溶于

70ml酒精中，隔水加热至90℃，冷却后加入石炭酸和苯胺油。

（2）碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml

（3）结晶紫染液：结晶紫2g，95%酒精20ml，草酸胺1g，蒸馏水80ml。

结晶紫溶于酒精，，草酸胺溶于蒸馏水。二液混合，此液置冰箱可保存

数月。

操作方法：

1、组织固定于10%甲醛液，按常规脱水包埋。

2、切片脱蜡至水。

3、苯胺油石炭酸复红液5分钟。

4、自来水冲洗，蒸馏水洗。

5、4%甲醛1分钟，蒸馏水洗2次。

6、苦味酸饱和水溶液处理2分钟。

7、经过95%酒精速洗后，放入自来水中立即变红色。

8、自来水冲洗，蒸馏水洗。

9、碘液作用2分钟，自来水洗，用滤纸直接吸干。

10、二甲苯苯胺油等份混合，进行分化苯。

11、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：革兰氏阳性细菌呈蓝色，阴性细菌呈红色，细胞核呈红色。

抗酸杆菌

苯酚碱性品红法：

碱性品红酒精液：碱性品红5克无水酒精100毫升

5%苯酚水溶液:苯酚5毫升(略加温,使其溶解)蒸馏水95毫升

苯酚碱性品红液:碱性品红酒精液1毫升

5%苯酚水溶液9毫升

染色步骤:

1.切片二甲苯脱蜡,95%酒精速洗

2.蒸馏水洗

3.苯酚碱性品红液染15～30分钟

4.蒸馏水洗

5.2%硫酸水溶液分化至适当为止

6.水洗

7.烘干,透明,封固

结果:抗酸杆菌(结核杆菌和麻风杆菌)呈红色。

真菌

（一）高碘酸法复红法

亮绿液：亮绿0.2g蒸馏水100ml冰醋酸0.2ml

Schiff试剂配制:

碱性品红1g，活性炭2g，当量盐酸20ml，偏重亚硫酸钠1.5g

1.碱性品红1g，放入200毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。

2.冷却至50℃时过滤，滤液中加入当量盐酸20毫升。

3.加偏重亚硫酸钠1.5g，置于暗处过夜。

4.加活性2g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃冰箱保存。

染色步骤:

1.切片脱蜡至蒸馏水。

2.0.5%～1%过碘酸水溶液5～10分钟。

3.蒸馏水洗多次。

4.Schiff液10～15分钟。

5.0.5%偏重亚硫酸钠液洗2次,每次1分钟。

6.流水冲洗10分钟。

7.亮绿液复染数秒钟。

8.水洗，酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。

结果：真菌红色，其他组织绿色。

（二）六胺银染色法

六胺银液配制：

3%六次甲基四胺水溶液5ml

2.5%硝酸银水溶液0.5ml

摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5～2ml加蒸馏水至30～40ml

步骤：

1、切片脱蜡至水，蒸馏水洗

2、0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗

3、六胺银液60℃，1～2小时，（或六胺银液80～90℃，半小时左右，）

蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）

4、0.2%氯化金调色数秒

5、丽春红淡染

6、水速洗

7、烘干，透明，封片。

结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。

幽门弯曲菌（HP）

（一）HP（美蓝法）

美蓝液:美蓝(亚甲基蓝)1.0g，硼酸0.5g，加蒸馏水至100ml

步骤：

1切片脱蜡至水

2入美蓝液中1分钟

3水洗后烤箱烘干封固(不宜酒精脱水)

结果:幽门弯曲菌深蓝色

优点:试剂配制容易，染色方法简单

应用：帮助慢性胃炎、消化道溃疡的诊断及治疗。

(二）、HP（硝酸银法）

试剂配制：

（一）醋酸缓冲贮备液，PH3.6

0.2N醋酸缓冲液，PH3.610ml

蒸馏水