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细胞培养常见问题及其解决范文--第1页

细胞培养常见问题及其解决

1.如何选用特殊细胞系培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中

同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开

始。

2.何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件

不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4可否使用与原先培养条件不同之血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产

生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使

用错误常会造成细胞无法存活。

5何谓FBS,FCS,CS,HS?

FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃

错误的使用字眼，请不要再使用。CS(calfserum)则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马

血清。

6培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量

将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养

时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。

7.Hanks平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hanks平衡

盐溶液(HBS)和Earles平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？

HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。

碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液

会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles

液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。

8.细胞之接种密度为何？

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依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造

成细胞无法生长之一重要原因。

9.悬浮性细胞应如何继代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将

培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培

养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

10.冷冻管应如何解冻？

取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并

注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须

注意安全，预防冷冻管之爆裂。

11.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，