医学教材 丙型肝炎实验室诊断.ppt

GlobalSpeakersSlideKit丙型肝炎实验室诊断主要内容丙型肝炎病毒的特性丙型肝炎的流行病学丙型肝炎的主要传播途径丙型肝炎的实验室诊断丙型肝炎检测结果解读HCV的特性黄病毒科有包膜单股正链RNA(9.6kb)3000氨基酸组成的多聚蛋白RNA聚合酶缺乏校正功能每日复制量：10兆(1012)病毒颗粒全球丙型肝炎的流行病学·丙型肝炎呈世界性流行，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因。·WHO统计表明：全球HCV的感染率约为3％，估计约1.7亿人感染了HCV，每年新发病例约3.5万例。·我国是丙型肝炎的高发区，抗-HCV阳性率为3.2%，近年来有上升趋势；

·抗-HCV阳性率随年龄增长而逐渐上升，无明显性别差异；

·HCV1b和2a基因型较为常见，其中以1b型为主；

·近年，我国丙肝发病数呈明显上升趋势。

丙肝的主要传播途径病毒灭活方法·对一般化学消毒剂敏感·100℃5分钟或60℃10小时·高压蒸气、甲醛熏蒸等丙型肝炎实验室诊断血清生化学检测HCV抗体测定分子生物学的检测★定性试验：检测血清中是否有HCV-RNA的存在★定量HCV-RNA测定：估计患者血清中HCV-RNA含量★HCV-RNA基因分型：确定HCV-RNA基因性质

血清生化学检测

·ALT、AST水平变化可反映肝细胞损害程度，但与肝组织炎症分度和病情的严重程度不平行；ALT水平下降是抗病毒治疗中出现应答的重要指标。·急性丙型肝炎患者血清白蛋白、凝血酶原活动度、胆碱酯酶活性降低较少；但慢性肝炎、肝硬化或重型肝炎时明显降低，其降低程度与疾病的严重程度成正比。凝血酶原时间可作为慢性丙型肝炎患者肝纤维化进展状况的监测指标。筛选试验——HCV抗体测定·酶免疫法（EIA）检测抗-HCV适用于高危人群筛查，也可用于HCV感染者的初筛。·HCV抗体检测作为筛选工具较理想廉价重现性好对于免疫功能正常者高敏感(99%)、高特异(99%)·一些透析患者、免疫功能缺陷患者以及自身免疫性疾病患者可出现抗－HCV假阳性，对于这些患者，HCVRNA的检测有助于确诊。HCV-RNA定性试验·HCVRNA定性检测的特异度在98%以上，只要一次病毒定性检测为阳性即可确证HCV感染·一次检测阴性不能完全排除HCV感染，应重复检查·RT-PCR方法各家不一，缺乏标准化·有许多因素影响着PCR方法，如标本处理及储存形式，引物设计、扩增倍数、反应条件、DNA产物的污染、扩增后产物检测系统等·严格的质控、操作人员的熟练程度尤为重要HCV-RNA定量试验·HCV病毒载量的高低与疾病的严重程度和疾病的进展并无绝对相关性,但可以作为抗病毒治疗疗效评估的观察指标.HCV基因型测定检测基因型方法一般分为二类：⑴检测HCV基因的点突变的筛选试验⑵评估HCV基因更大片段的验证性试验HCV基因型的筛选试验有：(1)对HCV高度保守的5’-NC区域行限制性片段长度多型性分析（RFLP）(2)对HCV-5’NC区域行逆转录斑点杂交分析，又名LIPA方法(3)用型特异的引物对HCV核心基因巢式PCR(4)病毒蛋白抗原性分型评估HCV基因更大片段的验证性试验-----序列分析HCV基因型测定·HCVRNA基因分型有助于判定治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案.谢谢！Slide*.HCV的特征HCV具有与黄病毒科病毒相似的病毒学和遗传学特征[1]。HCVRNA被一层具有保护作用的“外衣”包裹，这种“外衣”是由蛋白质组成的，又称为核衣壳。HCV呈球形，有包膜，直径约50nm，半衰期（T1/2)约为2.7小时[2]。未经治疗的HCV感染者，其体内每天产生和清除的病毒可达10万亿个（即1012）[2]。在结构上，HCV基因组为连续的、线性、单股正链RNA病毒[1]。基因组长度约9.6kb，编码一种由3000个氨基酸残基构成的多聚蛋白[3]。HCV具有高度的异质性，至少有6种已知的基因型(基因型1～6）和众多亚型（大于80种)[4]。此外，在HCV感染个体，其体内的HCV是由密切相关，但又不相同的病毒群，即准种构成[1，5]。HCV极易发生变异，由此产生的HCV准种和包膜蛋白的改变，使HCV易逃避宿主的免疫监测[6]。? 1.Pu