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流式细胞术必威体育精装版进展及临床应用

流式细胞术必威体育精装版进展及临床应用

流式细胞术(Flowcytometry,FCM),临床上也被称为流式

细胞分析,是利用流式细胞仪同时对单个细胞的多个参数进行定性/定

量(相对/绝对)分析的生物医学分析技术,检测速度快、通量高、灵敏

度高、采集数据量大、节约样本及成本,在临床上已经广泛应用于血液

学、免疫学、肿瘤学、精子学等检验领域,是未来临床检

验不可替代的检测方法之一。传统流式细胞术,也被称为荧光流式

细胞术,是基于荧光标记及荧光发射光谱检测的一门综合性技术,定量方

式多为定性分析,检测参数类型单一、数目有限,数据分析复杂且缺乏标

准化分析流程,不同检测中心间数据重现性差,这些都限制了它在临床检

验中进一步的推广及应用。近年来,为克服以上问题,流式细胞术不断突

破与创新,从定性检测发展为定量检测;从单参数分析、双参数分析发展

成为多参数分析;从检测细胞表面抗原到胞内抗原及分泌到胞外的抗原;

从检测蛋白表达水平发展为检测蛋白定位、蛋白功能及蛋白翻译后修

饰等;从一维定量检测发展为二维定量定位分析,从体外检测发展为体内

检测等;这些突破使得流式细胞术可以实现从单细胞水平去认识细胞在

生理或病理状态下的免疫表型、分子表型甚至各种复杂的信号通路变

化等,因此将更为广泛应用于临床检测。

1定量流式细胞术

定量流式细胞术(Quantitativeflowcytometry,QFCM),

即通过流式细胞仪定量检测细胞或微球上荧光素的中值荧光强度(Me

dianfluorescentintensity,MFI)或每个细胞结合的抗

体单位(Antibodiesboundtopercell,ABC)来对生物分子

进行相对或绝对定量的流式细胞技术。定量流式细胞术已被证明是一

种功能强大的临床检验技术,但由于MFI缺乏标准化度量方法,容易引

起不同检测中心检测结果重现性差,导致诊断和治疗决策的不确定性及

不可靠性,限制了其在临床的推广应用,因此,标准化MFI测量为流式

细胞术实现精确定量分析,在临床广泛应用的必经之路。目前,在临床应

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用过程中,为提高检测结果的准确性及重现性,定量流式细胞术必须做到

以下几点:淤样本及试剂处理严格按照标准操作规程,每一次检测必须设

置质控管;于流式细胞仪维护及校准。每一次检测前进行仪器校准;盂检

测流程标准化及规范化;榆数据分析自动化。流式检测数据量庞大,分析

难度大,经验性强,人工分析存在主观性和低保真度等特点。实现机器操

控及数据分析的标准化、自动化将会大大提高检测数据的再现性及可

靠性。

2多色流式细胞术

多色流式细胞术(Multicolorflowcytometry,MFC)是

指利用超过三种的荧光素实现多个参数同时检测的流式细胞技术。近

年来,随着流式细胞仪硬件(激光管、滤光片等)、软件(数据分析等)的

不断改进,荧光素的不断开发及应用,临床诊断领域的不断发展及需

求,MFC应运而生。大部分临床检验中心的流式细胞仪具备2~3个激

光器,可以同时检测9~10色荧光,甚至出现了5激光20参数同时检测

的流