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佐剂的作用与制备-免疫学实验技术-生物秀论坛『中国生物科

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佐剂的作用

概念

佐剂（adjuvant）是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的

物质，应用时可与抗原同时或预先注射于机体。佐剂本身可以有免疫

原性，也可以没有免疫原性。

应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性，从而提高抗

体的效价。颗粒性抗原（如细菌、细胞）因具有较强的免疫原性，一

般情况下不使用佐剂即可取得较好的免疫效果。对于可溶性大分子量

的蛋白质免疫原、人工抗原，初次免疫时必须使用佐剂才能取得较好

的免疫效果。另外，一般不连续两次使用完全弗氏佐剂，以免导致动

物严重反应。

免疫佐剂的作用归纳起来有：

（1）延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，佐剂可延长抗原在体

内滞留时间，避免频繁注射，有利于高亲和力抗体的产生；

（2）活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T和B细胞的相互作用，

从而对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用；

（3）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被

巨噬细胞吞噬；

（4）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；

（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。故免疫佐

剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；

（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；

（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。

由于佐剂常混有微量的其他物质，这些物质进入机体后也可引起

抗体的产生，影响抗体的特异性。注射完全佐剂可引起局部炎症反应，

使局部组织坏死

佐剂的制备

具备条件

佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件：

（1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增

强抗原的免疫原性；

（2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低

抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生

高滴度的抗体；

（3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而

增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能；

（4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。

常用佐剂的种类和制备

佐剂主要可分为两种：一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、

抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等；另一种本身无免疫

原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。目前应用

最多的是弗氏佐剂(Freundadjuvant)。

1．弗氏佐剂

弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂

和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组

分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。不完全佐剂中加卡

介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐

剂（FCA）。一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原

进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加

佐剂，则抗原量增大10-20倍。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混

匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。

在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗

原体积比一般为1：1，制备成，制备成油包水油包水乳状液。因为含SDS很易促使

其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化

状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一

定差异，无统一标准和固定模式。一般是每兔（约2kg重）或每羊

（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每

次不超过3mg。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：

（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，

待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴

加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成

为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是

研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。